[发明专利]一种HBD3 乳腺特异性表达载体及构建的重组细胞

权利要求书

1.一种HBD3乳腺特异性表达载体，其特征在于，包含带有信号转导肽的HBD3基因，分别在HBD3基因的上游和下游设有CSN5和CSN3作为调控元件。

2.如权利要求1所述的HBD3乳腺特异性表达载体，其特征在于，所示的带有信号转导肽的HBD3基因的序列如SEQ.IC.NO.1所示；CSN5的序列如SEQ.ID.NO.2所示，CSN3的序列如SEQ.ID.NO.3所示。

3.如权利要求2所述的HBD3乳腺特异性表达载体，其特征在于，所述的CSN3的下游还设有pUC ori和attB序列。

4.如权利要求3所述的HBD3乳腺特异性表达载体，其特征在于，所述的attB序列的下游还设有CMV组成型启动子，CMV组成型启动子下游插入两个同向的LoxP元件，在LoxP元件下游设有第一荧光指示蛋白开放阅读框及其终止子，在两个LoxP元件之间设有第二荧光指示蛋白开放阅读框及其终止子和抗生素筛选元件。

5.如权利要求4所述的HBD3乳腺特异性表达载体，其特征在于，所述的attB序列如SEQ.ID.NO.4所示，所述的CMV组成型启动子为Pcmv IE启动子。

6.如权利要求4所述的HBD3乳腺特异性表达载体，其特征在于，所述的HBD3乳腺特异性表达载体，所述的第一荧光指示蛋白开放阅读框为绿色荧光蛋白EGFP开放阅读框，第二荧光指示蛋白开放阅读框为红色荧光蛋白DsRed1开放阅读框，其终止子均为Sv40终止子。

7.如权利要求1或3所述的HBD3乳腺特异性表达载体，其特征在于，所述的HBD3乳腺特异性表达载体为pARNG-HBD3，将HBD3基因插入到pARNG载体的CSN5和CSN3之间。

8.一种重组牛胎儿成纤维细胞，其特征在于，宿主细胞为牛胎儿成纤维细胞，通过共转染的方式将外源性表达载体pARNG-HBD3在链霉菌噬菌体φC31整合酶的作用下整合到牛胎儿成纤维细胞的基因组假attP位点，通过药物筛选取得阳性克隆，再经过Cre重组酶的处理，去除载体上两个同向LoxP序列之间的抗生素筛选标记，得到去除抗生素筛选标记的包含HBD3乳腺特异性表达载体的重组牛胎儿成纤维细胞。

9.如权利要求8所述的重组牛胎儿成纤维细胞，其特征在于，所述的pARNG-HBD3整合到牛胎儿成纤维细胞的第2号常染色体上，位于KIAA1486基因和IRS-1基因之间的间隔序列。

10.权利要求8或9所述的去除抗生素筛选标记的包含HBD3乳腺特异性表达载体的重组牛胎儿成纤维细胞作为核移植构建转基因克隆胚的核供体细胞的应用。