[发明专利]一种检测银屑病相关风险基因的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学和医学领域，更具体的，本发明涉及一种检测银屑病相关风险基因的试剂盒，通过同时检测与银屑病关联的基因IL12B和IL23R的单核苷酸多态性位点基因型来评估个体罹患银屑病的风险性。

背景技术

银屑病是一种临床常见的以红斑鳞屑为基本表现的慢性炎症性皮肤疾病，可分为四种临床类型：寻常型、关节病型、红皮病型和脓疱型，其中寻常型银屑病占99%以上。该病发病原因不清，可能和遗传、免疫以及各种环境因素共同作用有关。目前普遍认为，银屑病是在环境因素刺激下由遗传背景控制的免疫失衡性疾病。遗传流行病学和遗传学研究均证实，银屑病是一种多因子遗传模式的复杂疾病，它涉及到多个基因间的相互作用及基因与环境的交互作用。

随着人类基因组单体型图计划（HapMap）数据的完善和商业化全基因组SNP分型芯片成本的不断降低，以及新的统计方法和软件的出现，将全基因组关联分析（Genome-Wide Association Study，GWAS）应用于复杂疾病研究的时机成熟了。GWAS是一种对全基因组范围内的常见遗传变异：单核苷酸多态性（Single nucleotide polymorphism，SNP）和拷贝数变异（Copy number variation，CNV）进行总体关联分析的方法，即在全基因组范围内选择遗传变异进行基因分型，比较病例和对照间每个变异频率的差异，计算变异与疾病的关联强度，选出最相关的变异进行验证并最终确认与疾病相关。在全基因组范围内进行整体研究，能够一次性对疾病进行轮廓性概览，克服了既往的知识和理论造成先入为主的影响，避免了区域研究造成的偏倚和局限。

最近，利用GWAS策略发现了令人感兴趣的银屑病易感基因，其结果和方法学均为银屑病将来的研究起到重要的指导作用。人类白细胞抗原（HLA）区域是参与人类免疫疾病中免疫反应的主要遗传位点，无论是以往的连锁分析还是现在的全基因组关联分析研究，都一致认为该区域与银屑病的发病密切相关。全基因组关联分析的结果提示，HLA-C区域与银屑病相关的信号非常高（P＜1.9×10^-208），而且HLA-C与其他几个银屑病易感区域存在基因与基因之间的交互作用。该结果确证了人类白细胞抗原的免疫学机制在银屑病发病过程的重要地位。

IL-12于1989年被首次发现，在细胞介导的免疫反应中发挥重要作用。而最近提到较多的IL-23在分子结构上与IL-12接近，结构上两者有较大的同源性，且共用一个亚单位IL-12p40，该亚单位通过IL12B基因编码。国外遗传学研究发现IL12B基因与银屑病的易感性相关，而最近的一项选择性覆盖全基因组SNP的关联研究在高加索人群中证实了该结果，同时也发现了IL23R基因也与银屑病发病相关。在中国人群中，我们通过GWAS研究，在IL12B基因的区域也发现了两个与银屑病显著相关的SNP点，并证实了IL12B基因与银屑病的易感性相关。此外，目前的研究还表明，IL12B基因还与哮喘、特应性皮炎和克隆病等免疫相关性疾病相关。Nail等人对高加索人群进行GWAS，还发现更多的与免疫相关的基因和银屑病的易感性相关，包括涉及IL-23信号通路的三个基因（IL23A、IL23R和IL12B），TNF-α下游调节NF-kβ表达的两个基因（TNIP1和TNFAIP3）以及调节Th2免疫反应的两个基因（IL4和IL13）。一些研究者使用IL12p40抗体用于银屑病的临床治疗并获得满意的疗效，进一步说明IL12/23相关基因在银屑病发病中的重要作用，同时也为银屑病的治疗提供新的研究方向。上述基因都涉及银屑病免疫应答和调节的过程，进一步提示免疫机制在银屑病的发病中发挥重要作用。

发明内容

基于IL12B基因、IL23R基因上的2个SNPs位点多态性可用来评估个体罹患银屑病风险性的基础上，本发明提供一种检测银屑病相关风险基因的试剂盒。

试剂盒包括：

检测IL12B基因上rs6887695号SNP多态性基因型的特异性引物对及特异性荧光探针对；

检测IL23R基因上rs7517847号SNP多态性基因型的特异性引物对及特异性荧光探针对；

荧光定量PCR反应组件（包括Taq酶、dNTP混合液、MgCl₂溶液、反应缓冲液、去离子水等）。