[发明专利]PIG3基因或蛋白表达量检测试剂在制备诊断唐氏综合症的试剂盒中的应用

说明书

技术领域

本发明属于医学分子生物学领域，涉及PIG3基因或蛋白表达量检测试剂在制备诊断唐氏综合症的试剂盒中的应用。

背景技术

唐氏综合症(Down' s syndrome，DS)是人类最常见的一种染色体病，由于在配子(生殖细胞)形成期或合子期(约在受精后24小时内)细胞内多了一条21号染色体所致。患者有严重的智力障碍，生活难以自理，且多合并多系统的疾病，给家庭与社会带来了沉重的负担。因此自上世纪60年代起，人们即致力于唐氏综合症的产前筛查。

产前检查可以作入侵性诊断，入侵性诊断通常有以下几种:

1.羊水细胞制备染色体

羊膜穿刺抽出羊水细胞，培养9-12天后，进行染色体核型分析。常规羊膜腔穿刺术通常在孕16-20周进行，此期间羊水量已达200-400m1，胎儿漂浮羊膜腔内，穿刺危险小，且羊水中有活力的细胞比例最高，易成功。羊水细胞诊断染色异常疾病的可靠性超过99%，但是侵入性检查对胎儿可造成一定的损害，如导致医源性流产。据统计进行羊膜腔穿刺检查流产率约为0.3%(0.1%-0.4%)，再加上羊水细胞需培养2至3周，确诊后孕妇只能行引产术、承受很大痛苦。

2.绒毛细胞制备染色体

1983年，Simon用直接法成功地进行了绒毛组织的染色体核型分析，并用于1例DS的产前诊断。绒毛组织检查提供了1个孕早期产前诊断方法。孕9-11周时，在超声监测下从胎盘边缘取少量绒毛组织进行培养，并作染色体核型分析。绒毛活检比妊娠中期羊膜穿刺更易引起流产，据统计进行绒毛取样检查流产率约为0.6%。同时，还应注意避免母体细胞及其他细胞污染。

3.胎儿血细胞培养制备染色体

该方法经腹穿刺胎儿脐血，培养48-72小时后制片，此法能校正羊水细胞。绒毛细胞培养出现的假嵌合体，结果准确可靠。此法自然流产发生率0.5%-1.5%，反复的脐带穿刺，可导致穿刺点出血，造成胎儿急性贫血，严重者可致胎儿及新生儿死亡。

以上方法都是通过把一支细针头穿过孕妇的肚皮，进入子宫，然后抽取妊娠的细胞进行检验。由于需要把仪器放进母亲体内，所以这两种检查称为入侵性检查。以上三种入侵检测方法会引起0.3%-1.5%的流产机会。但是，由于这两种检查抽取的胎盘绒毛组织和胎水的细胞成分和胎儿的一样，检验细胞样本的染色体便可准确验出胎儿是否患上唐氏综合症，准确度达到99%。

经典的细胞遗传学方法是诊断唐氏综合症的金标准，但此方法有实验周期长、费力、羊水细胞培养成功与否多种因素的影响等缺点，这说明仅靠常规的细胞遗传学方法进行唐氏综合症产前筛查是不够的。

由于入侵性的绒毛抽吸和羊膜穿刺术等筛查手段可能导致流产，所以较安全的方法是进行非入侵性筛查试验，以评估胎儿患上唐氏综合症的几率，筛查结果显示怀有唐氏综合症胎儿几率较高的孕妇才需要接受入侵性的诊断，经过筛查，只有约5%的孕妇需要作入侵性诊断，但非入侵性筛查准确度不及上述入侵性的诊断高。

非入侵性筛查试验有三种方法:超声唐氏综合症产前筛查法、孕妇血清筛查和将二者结合起来进行产前筛查。

1.超声唐氏综合症产前筛查法

超声进行唐氏综合症产前筛查是一种非侵入性的检查方法，既能有效降低出生缺陷，又可以极大地减少由于侵入性检查所造成地正常胎儿地流产。

超声唐氏综合症产前筛查方法是通过超声测量10-13周孕胎儿的头臀长(Crown Rump Length，CRL)，确定“超声孕周”后，再测量胎儿的颈部半透明层厚度((Nichol Translucency，  NT)， NT大于等于2.5mm为筛查阳性病例((NT阈值((Cut-of)值为2.5)。对筛查阳性的病例建议羊水穿刺，再经细胞遗传学证实，进而研究各地区或民族的胎儿NT与CRL以及孕周的关系。目前该筛查方法主要运用于妊娠10-13周产前筛查，即妊娠早期唐氏综合症风险筛查中。

2.孕妇血清筛查

孕妇血清筛查是通过抽取母亲的血液样本，检验其中一项或几项指标的含量，和相同怀孕天数正常孕妇血清中的同种标记物含量相比较，通过计算机软件计算胎儿患唐氏综合症的风险值。

目前，测定孕妇血清标志物含量方法有以下几种:

2.1磁性分离酶联免疫测定法