[发明专利]一种低脂奶的生产方法

说明书

技术领域

本发明涉及基因工程领域，特别是涉及一种利用转基因哺乳动物生产低脂奶的方法。

背景技术

脂蛋白脂酶(lipoprotein lipase，LPL)是将血浆乳糜微粒和极低密度脂蛋白中的甘油三酯水解为甘油和游离脂防酸反应的限速酶，其与机体肥胖与否密切相关，在血浆脂蛋白的运输过程和能量代谢方面也起着重要作用。它主要由脂肪细胞、心肌细胞、骨骼肌细胞等实质细胞分泌，在泌乳期的乳腺组织中亦有合成，并且乳腺组织是LPL在各物种中表达的保守位点。

LPL是已报告的基因突变最丰富的蛋白质之一，至今已达143种突变，且90％以上的突变位点均位于功能区。LPL基因的突变有可能影响其催化功能，LPL活性或量的改变及功能的失衡与脂代谢紊乱(高甘油三酯血症、低高密度脂蛋白血症)、动脉粥样硬化、冠心病、肥胖等一系列临床症状有关。此外，LPL基因已作为动物脂肪代谢和沉积以及畜禽肉质研究的重要基因，与畜禽瘦肉率的提高，调节动物的体重，影响肉的风味等方面有着密切关系。近年来LPL成为研究的热点，构建了各种用于研究其功能的转基因小鼠模型，其中包括全身表达的，或分别在脂肪、肌肉、心脏、肝等组织中特异表达的，但没有发现LPL在乳腺中特异表达的相关报道。

随着人们生活水平的提高，对健康优质奶品的要求也越来越高，人们更加关注牛奶中的优质蛋白质，而希望牛奶中所含的脂肪更少。但是目前市场上的脱脂牛奶，在脱脂的过程中脂溶性的维生素也会被除去，主要是维生素A和维生素D，影响了人体对钙质的吸收，而且如果完全脱除牛奶中的脂肪，会破坏其营养价值，影响牛奶的口感和风味。

发明内容

本发明的目的是通过基因工程技术，制备转基因动物，并利用该转基因动物生产低脂奶。

为了实现本发明目的，本发明的一种低脂奶的生产方法，其是将编码人源脂蛋白脂酶的基因转入哺乳动物中，并利用该转基因动物生产低脂奶。

优选地，前述方法是将编码人源脂蛋白脂酶的基因通过显微注射法、体细胞克隆法或精子载体法等方法转入哺乳动物中，并利用该转基因动物生产低脂奶。

其中，人源脂蛋白脂酶的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，或该序列经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。

优选地，编码上述人源脂蛋白脂酶的基因序列如SEQ ID No.2所示。

前述的方法，所述哺乳动物为牛、羊、猪、马、兔、鹿、狗等。

本发明还提供含有编码人源脂蛋白脂酶的基因的乳腺特异表达载体。优选的出发载体为pBC1。

本发明还提供含有上述表达载体的转基因哺乳动物细胞。

本发明还提供一种制备克隆胚胎的方法，其以上述转基因细胞为核移植供体细胞，离体的卵母细胞为核移植受体细胞，通过核移植技术获得克隆胚胎。

本发明进一步提供一种制备转基因家畜的方法，其是将上述方法制备的克隆胚胎通过非手术法移入家畜子宫内进行妊娠，获得转基因家畜。

本发明利用构建LPL乳腺特异表达载体，制备转基因动物，特别是转基因奶牛或奶山羊，生产出乳脂率显著减低的奶制品，对于提高奶制品的应用价值具有重要意义。

附图说明

图1为线性化且去除了pBC1原核载体骨架结构部分后的特异性人LPL乳腺表达载体。

图2为NotI和SalI双酶切表达载体pBC-hLPL线性化后的载体凝胶电泳结果，其中，M为λ/HindIII分子量标准，1和2为线性化后的载体片段。

图3为转基因小鼠制备流程。

图4为PCR检测F0代阳性转基因小鼠结果，其中，M为1kb梯度DNA分子量标准，转基因小鼠基因组分别为11、16、17、21、25、27、31和37，WT为阴性对照，P为阳性质粒。

图5为Southern blotting检测阳性转基因小鼠结果，其中，M：为1kb梯度DNA分子量标准，WT为野生型小鼠对照，P1、P5、P10分别为相当于1、5、10个拷贝的阳性质粒对照杂交结果，11、16、17、21、25、27、31和37分别为F0代阳性小鼠对应基因组的杂交结果。

图6为Western Blot检测转基因小鼠乳样中人源LPL表达情况，其中，H为人奶样品杂交结果，WT为野生型小鼠乳样杂交对照，21、25、27、31和37为F0代阳性小鼠乳样杂交结果。

具体实施方式