[发明专利]一种具有广谱肿瘤细胞杀伤活性的重组人溶菌酶及其用途

说明书

技术领域

本发明属于医药领域，具体地涉及一种具有广谱肿瘤细胞杀伤活性的重组人溶菌酶及其用途。

背景技术

肿瘤细胞有三个显著的基本特征即：不死性，迁移性和失去接触抑制。此外，肿瘤细胞还有许多不同于正常细胞的生理、生化和形态特征。肿瘤细胞周期不受正常生长调控系统的控制，能持续的分裂与增殖。通常根据肿瘤的实质形态分化成熟程度和异型性大小来确定肿瘤的良恶性和肿瘤的恶性程度。恶性肿瘤生长迅速，可转移到身体其它部位，还会产生有害物质，破坏正常器官结构，使机体功能失调，甚至威胁生命。

肿瘤治疗的常规方法有手术、放疗和化疗三种。手术切除肿瘤的治愈率，取决于肿瘤的位置、大小和性质，有些肿瘤长在深部无法触及，或位于要害部位则不能用手术方法治疗。放疗就是用放射线(如X、γ射线)杀死肿瘤细胞，可以对肿瘤细胞进行外照射，也可以置入放射源进行体内照射，放疗也会杀上正常的增殖较快的细胞，引起感染、出血、粘膜炎、脱发等。化疗主要是使用一些化学类药物，例如，使用DNA合成抑制剂(如5-氟尿嘧啶)或细胞分裂抑制剂(如长春新碱、紫杉酚)之类的细胞毒制剂物来抑制肿瘤细胞，同样对所有分裂细胞具有杀伤作用，因而也会引起上述副作用。

目前也使用了一些用于抑制肿瘤生长的蛋白类药物，如内皮抑素(Endostatin)，对多种实体瘤的生长和转移都能产生抑制作用。

人溶菌酶(human lysozyme，hLZ)是机体内非特异性免疫的重要组分，它广泛存在于外分泌液、多形性细胞和巨噬细胞内。溶菌酶能水解革兰氏阳性细菌胞壁的乙酰氨基多糖，使细胞壁破坏而导致细菌死亡，在体内补体等因素的作用下对多种革兰氏阴性菌也具有较强的抑菌作用，临床前数据表明它对1040株致病菌具有抗菌活性。溶菌酶可与带负电荷的病毒蛋白直接结合，与DNA、RNA、脱辅基蛋白形成复盐，使病毒失活，因此，该酶具有抗菌、消炎、抗病毒作用。

研究表明，有许多种不同生物体会产生溶菌酶，近20年来国内外已开发出不同来源的新型溶菌酶。然而，各自不同的溶菌酶除了具有共同的溶菌特性之外，其他特性存在很大差异或各不相同。虽然有关于溶菌酶用于治疗肿瘤的研究，但是这些药理研究主要限于从蛋清中提取的蛋清溶菌酶，研究结果仅发现蛋清溶菌酶可作为一种较强的免疫调节因子用于预防和治疗恶性肿瘤，并没有发现其对肿瘤细胞的生长有直接抑制作用。

总之，迄今尚未发现人溶菌酶对肿瘤细胞有直接杀伤作用并应用于抗肿瘤研究的报道，更没有将人溶菌酶可用于直接预防和治疗肿瘤的报道。

发明内容

本发明提供了一种重组人溶菌酶的新用途，用于制备(a)预防或抑制人肿瘤生长、转移或人肿瘤细胞增长、迁移的药物组合物，或(b)诱导人肿瘤细胞凋亡的药物组合物，或(c)人肿瘤细胞的凋亡诱导剂。

本发明提供了一种体外抑制肿瘤细胞生长和/或诱导肿瘤细胞凋亡的方法。

本发明提供了一种预防或抑制哺乳动物肿瘤生长、转移或肿瘤细胞增长、迁移的方法。

本发明还提供了一种测定待测人溶菌酶样品的活性的方法。

本发明第一方面提供了一种重组人溶菌酶的用途，用于制备

(a)治疗人肿瘤的药物，或抑制人肿瘤细胞的药物组合物，或抑制肿瘤或肿瘤细胞的抑制剂；或

(b)诱导人肿瘤细胞凋亡的药物组合物，或诱导人肿瘤细胞的凋亡诱导剂。

在另一优选例中，所述的抑制包括抑制人肿瘤的生长或转移，以及抑制人肿瘤细胞的生长或迁移。

在另一优选例中，所述重组人溶菌酶来源于转基因哺乳动物的乳汁。

在另一优选例中，所述转基因哺乳动物为山羊、绵羊、牛、猪、鼠或兔。

在另一优选例中，所述转基因哺乳动物为山羊。

在另一优选例中，所述重组人溶菌酶对正常的人血管内皮细胞无或基本无杀伤作用。

在另一优选例中，所述的重组人溶菌酶对正常的人血管内皮细胞生长的抑制率≤20％。

在另一优选例中，所述肿瘤或者肿瘤细胞选自以下肿瘤或肿瘤细胞：黑色素瘤、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、肺癌、肝癌、视网膜母细胞瘤、星形细胞瘤、成胶质细胞瘤、白细胞过多症、成神经细胞瘤、鳞状细胞癌、头癌、颈癌、牙龈癌、舌癌、乳癌、前列腺癌、肾癌、骨癌、睾丸癌、卵巢癌、间皮瘤、肉瘤、宫颈癌、胃癌、淋巴瘤、脑瘤、结肠癌或膀胱癌。

在另一优选例中，所述肿瘤或肿瘤细胞选自以下肿瘤或其细胞：人胃癌、人卵巢癌、人肺癌、人白血病或人结肠癌。

在另一优选例中，所述药物组合物含有

(a)1-99wt％的重组人溶菌酶；