[发明专利]金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌检测试剂盒及检测方法

说明书

技术领域

本发明属于微生物技术领域，尤其涉及一种金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌检测试剂盒及检测方法。

背景技术

金黄色葡萄球菌是人类的一种重要病原菌，隶属于葡萄球菌属，有“嗜肉菌″的别称，是革兰氏阳性菌的代表。金黄色葡萄球菌致病力强弱主要取决于其产生的侵袭性酶和毒素，可引起局部化脓感染，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染，中毒症状严重，主要表现为呕吐、发热、腹泻。

溶血性链球菌在自然界中分布较广，存在于水、空气、尘埃、粪便及健康人和动物的口腔、鼻腔、咽喉中，可通过直接接触、空气飞沫传播或通过皮肤、粘膜伤口感染，被污染的食品如奶、肉、蛋及其制品也会对人类进行感染。能引起皮肤、皮下组织的化脓性炎症、呼吸道感染、流行性咽炎的爆发性流行以及新生儿败血症、细菌性心内膜炎、猩红热和风湿热、肾小球肾炎等变态反应。

国际上通用的金黄色葡萄球菌采用培养检测如下：

(1)样品处理

无菌取25g或25mL食品样品，放入225mL灭菌生理盐水中均质，制成10^-1稀释液。

(2)增菌培养

将10^-1稀释液接入7.5％NaCl肉汤或胰蛋白胨肉汤中，37℃培养24小时。

(3)分离培养

将上述稀释液或培养液分别划线血平板和Baird-Parker平板，置37℃培养24～48小时。金黄色葡萄球菌在血平板上呈金黄或白色菌落，大而凸起，表面光滑，周围有溶血圈。在Baird-Parker平板上菌落为圆形，直径2～3mm，颜色灰或黑色，周围有一浑浊带。

(4)染色观察

从平板上挑取可疑性菌落进行革兰氏染色，金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性，显微镜下呈葡萄状排列无芽胞、荚膜，直径0.5～1μm。

(5)血浆凝固酶试验

吸取0.5mL兔血浆与0.5mL金黄色葡萄球菌肉浸液肉汤24小时培养物充分混匀，置36±1℃培养，每隔半小时观察一次，连续观察6小时，出现凝固，即将小试管倾斜或倒置时，内容物不流动，判为阳性。同时做阴阳性对照。

(6)耐热核酸酶试验

将24小时肉汤培养物沸水浴处理15min，用接种环划线刺种于甲苯胺兰-DNA平板，36±1℃培养24小时，在刺种线周围出现淡粉色者为阳性。本试验金黄色葡萄球菌为阳性。

国际上通用的溶血性链球菌采用培养法检测如下：

(1)样品处理

取25g固体(或25mL液体)检样加入225mL灭菌生理盐水，制成混悬液。

(2)分离培养

吸取5mL混悬液接种至50mL葡萄糖肉浸液肉汤，或直接划线于血平板(如检样污染严重，可同时接种5mL至匹克氏肉汤)，36℃培养24h，接种血平板，36℃培养24h，挑起乙型溶血圆形突起的细小菌落，在血平板上分纯，观察在液体和固体中的培养特征、溶血情况及革兰氏染色、形态，并进行链激酶试验和杆菌肽敏感试验。

链激酶试验：吸取草酸钾血浆0.2mL，加0.8mL灭菌生理盐水，混匀，再加入链球菌18～24小时36℃肉浸液肉汤培养物0.5mL及0.25％氯化钙0.25mL，混匀，置于36℃水浴10min，血浆混合物自行凝固，观察凝块重新完全溶解的时间，完全溶解为阳性，如24小时后不溶解即为阴性。同时用肉浸液肉汤做阴性对照，用已知的链激酶阳性的菌株做阳性对照。

杆菌肽敏感试验：取典型菌落的菌液涂布于血平板上，用灭菌镊子夹取每片含有0.04单位的杆菌肽纸片置于上述平板上，36℃培养18～24小时，如有抑菌圈出现即为阳性。用已知的阳性菌株做对照。

根据上述通用方法，同时检测样品中金黄色葡萄球菌和溶血性链球菌这两种细菌的周期长(至少48小时)、操作烦琐、灵敏度低、易污染、程序复杂和所需试剂(生化试验试剂和血清)繁多等缺点已远远不能满足快速检测金黄色葡萄球菌和溶血性链球菌的要求。

发明内容

有鉴于此，本发明提供一种金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌检测试剂盒，解决现有技术中同时检测金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌灵敏的低，周期长等技术问题，以及金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌的检测方法。

本发明是这样实现的，