[发明专利]肺表面活性提取物与肺表面活性物质相关蛋白A的组合物、制备方法及其制药用途

说明书

技术领域

本发明涉及肺表面活性提取物及肺表面活性物质相关蛋白A（surfactant associated protein A,SP-A）的组合物，内容包括三部分：⑴ 肺表面活性提取物和SP-A的组合物，肺磷脂SP-A组合物；⑵ 组合物的制备方法；⑶ 组合物在治疗肺表面活性物质缺乏或功能障碍类疾病，如肺炎、胎粪吸入综合征、支气管肺发育不良、婴幼儿体外循环术、肺损伤等所致的急性呼吸窘迫综合征以及慢性阻塞性肺疾病方面的制药用途。 

本发明适合工业化生产。 

背景技术

肺表面活性物质（pulmonary surfactant，PS）是肺泡Ⅱ型细胞分泌的磷脂蛋白复合物，有降低肺泡气液界面表面张力，防止肺不张和肺水肿，保持肺泡稳定，参与肺的防御功能等重要作用，组成包括90%左右的脂类和10%左右的蛋白，蛋白中与PS生理功能有关的主要有四种，亲水性的SP-A、SP-D和疏水性的SP-B、SP-C，除SP-D外，其他三种蛋白在PS的功能活性中均有重要意义（Kaushik Nag edited  Lung Surfactants: function and disorder，Published by Taylor ＆ Francis Group，2005）。 

现有技术制备的肺表面活性提取物是指牛、猪或其他哺乳动物的肺灌洗液或全肺匀浆提取液，经分离、提取、纯化得到的磷脂蛋白复合物，也称PS制剂，因工艺所限，组成以磷脂为主，仅含有少量疏水性蛋白SP-Ｂ和SP-C，是治疗早产儿呼吸窘迫综合征（neonatal respiratory distress syndrome，NRDS）的重要急救药，已在全球大多数国家和地区应用，自上市以来早产儿死亡率下降一半以上。但是目前临床应用的PS制剂均不含具有免疫调控作用的SP-A（Bernhard，Mottaghian，Gebert，et al. ,Commercial versus native surfactants Surface Activity，Molecular Components，and the Effects of Calcium，Am J Respir Crit Care Med，2000，Vol 162：1524），在PS功能障碍类疾病，如肺炎、胎粪吸入综合征、婴幼儿体外循环术、支气管肺发育不良、肺损伤等导致的急性呼吸窘迫综合征（acute respiratory distress syndrome，ARDS）以及慢性阻塞性肺疾病等的疗效有限，因受到炎症蛋白或因子的抑制，作用持续时间短，仅能在短期内改善肺功能。 

SP-A在肺表面活性物质蛋白中含量最高，属糖结合蛋白家族，由248个氨基酸组成，等电点4.6-5.5，分子量约为26-38kDa，具有多种生理功能，如参与肺泡表面PS膜的形成和代谢，稳定细胞内外肺表面活性物质，参与局部防御，增强PS对各种抑制因子的抵抗，调节局部免疫和炎症反应等，是近年来的研究热点。 

分析现有技术，肺表面活性提取物和SP-A的制备技术存在如下问题： 

⑴ 对于肺表面活性提取物的制备，无论其来源是全肺匀浆提取液，还是肺灌洗液，均需要处理大量的、含有多组分磷脂和表面活性物质蛋白的混悬液或乳浊液。传统方法主要是采用多级离心或差速离心，然后再使用有机溶剂提取、层析纯化或超临界提纯等。其中多级离心和差速离心耗时长，能耗大，生产成本高，磷脂组分收率低。

⑵ 对于SP-A的分离和制备，有从动物肺灌洗液中提取得到SP-A；也有研究者通过基因重组技术将SP-A功能片段融合到工程菌种中，培养、纯化得到高纯度的SP-A。前者实用性不强，会影响动物肺来源的PS制剂的生产，无法实现产业化；后者仅处于实验室阶段，且不能得到完整表达的SP-A，距离产业化还有很长的路要探索。 

⑶ 对于肺表面活性提取物与SP-A的组合物，鉴于SP-A为亲水性蛋白，PS制剂中的磷脂和小分子蛋白均为疏水性，两者以怎样的方式、怎样的比例组合，才能得到活性高且稳定的制剂，是目前尚未解决的问题。 

为此，本发明将肺表面活性提取物与SP-A组合，得到活性更高、治疗范围更广的新组合物。同时选择与现有技术不同的路线和工艺，开发了与传统方法不同、能更有效地制备牛肺表面活性提取物的方法，并利用肺表面活性提取物生产过程中的废弃液，提取得到具有生物活性的高纯度SP-A。本方法不影响肺表面活性提取物的生产，解决了产业化问题。 

发明内容