[发明专利]一种检测胶质母细胞瘤Id1 mRNA表达量的试剂盒

说明书

技术领域：

本发明属于生物工程领域，尤其涉及一种试剂盒，具体来说是一种检测胶质母细胞瘤Id1 mRNA表达量的试剂盒。 

背景技术：

胶质瘤是起源于胶质细胞的肿瘤，是人类中枢神经系统最常见的原发性肿瘤，约占颅内肿瘤的35.26％一60.96％。WHO于2008年公布按死亡率顺序排位，恶性胶质瘤是34岁以下肿瘤患者的第2位死亡原因，是35～54岁患者的第3位死亡原因。在全球，每年恶性脑胶质瘤无情地夺去18～60万中青年人的宝贵生命。目前治疗胶质母细胞瘤的标准方法是外科切除后再辅以放射治疗和口服化疗药。但是对于GBM患者，其总体生存期为14.6个月，而无进展生存期只有7.9个月。肿瘤组织中基因的检测有利于进一步从分子机制上对胶质瘤进行分型、诊断及预后判断。因此，胶质母细胞瘤患者中基因水平是其进行认识胶质瘤发生发展机制的一个重要指标。 

肿瘤组织中特异性基因mRNA的定量测定，有利于肿瘤的早期诊断，治疗方案的确定以及预后的判断。随着分子生物学技术的飞速发展及其在医学研究中的广泛应用，通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测外周血中微量肿瘤细胞已成为可能并被尝试。 

实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入一对引物的同时加入一个特异性荧光探针，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程。目前常用的Taqman荧光探针为寡核昔酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收，故检测不到荧光；在PCR扩增过程中，Taq酶的5’-3’外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号。在PCR扩增过程中，每个循环结束后检测一次荧光强度，整个反应结束后，便可得到一条工作曲线，根据该曲线可对未知模板进行定量分析。实时荧光定量PCR技术是一种能够准确定量mRNA的检测方法，通过检测肿瘤特异性基因mRNA的表达以 判断循环肿瘤细胞的存在。 

Id1(DNA结合抑制蛋白)蛋白属于helix-loop-helix(HLH)蛋白家族。Id1蛋白通过形成无活性的异二聚体，从而阻止bHLH家族转入因子介导的细胞分化。并且阻止DNA在E boxes(CANNTG)，N boxes(CACNAG)，或Ets(GGAA/T)等位点与bHLH蛋白结合，从而调节基因的转录。Id1蛋白在功能上慢参与调节细胞间信号传导、细胞生长、分化、凋亡与血管生成。一般的，Id1的mRNA的高表达出现在分化不全或者是胚胎细胞组织内。Id1蛋白在恶性肿瘤的的发生中起着潜在的“扳机”样作用，并且是一个潜在的癌基因。Id1在肿瘤中的作用是参与肿瘤细胞的分化、增生、调节细胞周期、促血管生成及参与肿瘤细胞的侵袭和迁移。当Id1基因的调节失衡，就会促使肿瘤的发生。(8J.D.Norton，ID helix-loop-helix proteins in cell growth，differentiation and tumorigenesis，J.Cell Sci.113(2000)，pp.3897-3905.View Record in Scopus|Cited By in Scopus(329)。)Id1在GBM中的蛋白表达是升高的，GBM患者的Id1 mRNA表达亦明显上调。K-M总体生存分析发现：Id1基因的拷贝数(copy number)值越高，GBM患者的预后越差。Id1的mRNA表达越高，预后越差。cox回归分析发现，Id1的表达越高，死亡危险度升高(p＜0.05)。而无进展生存期(PFS)相关分析发现，Id1与肿瘤的复发成正相关。故Id1在胶质母细胞瘤中起到一个恶性相关的因子。 

发明内容：

本发明的目的在于提供一种检测人胶质母细胞瘤Id1 mRNA表达量的试剂盒，要解决现有技术中没有合适的手段检测检测人胶质母细胞瘤Id1 mRNA表达量的技术问题。 

本发明一种检测人胶质母细胞瘤Id1 mRNA表达量的试剂盒，包括两个引物和探针，一个引物的序列如SEQ ID NO：1所示，另外一个引物的序列如SEQ IDNO：2所示，所述的探针的序列如SEQ ID NO：3所示。 

进一步的，所述试剂盒中还包括进行实时荧光定量RT-PCR所需的试剂。 

本发明还提供了上述的试剂盒在检测人胶质母细胞瘤DNA结合抑制蛋白Id1 mRNA表达量中的应用。