[发明专利]一种白唇竹叶青蛇毒中提取磷脂酶A2的方法无效
| 申请号： | 201210061100.6 | 申请日： | 2012-03-09 |
| 公开（公告）号： | CN102533694A | 公开（公告）日： | 2012-07-04 |
| 发明（设计）人： | 余晓东;和七一;邓疆渝 | 申请（专利权）人： | 重庆师范大学 |
| 主分类号： | C12N9/16 | 分类号： | C12N9/16 |
| 代理公司： | 重庆市前沿专利事务所 50211 | 代理人： | 郭云 |
| 地址： | 400047 *** | 国省代码： | 重庆;85 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 竹叶青 蛇毒 提取 磷脂酶 sub 方法 | ||
1.一种白唇竹叶青蛇毒中提取磷脂酶A2的方法，其特征在于：按如下步骤进行：
(1)白唇竹叶青蛇毒预处理：收集毒液，将毒液冷冻干燥成粉末状备用，取粗毒冻干粉0.3～1g，溶解于5ml pH 5.2-5.8，0.025～0.05mol醋酸钠缓冲液中，冷冻离心，取上清液待用；
(2)CM-Sephadex C-50阳离子交换层析：用pH 5.2-5.8，0.025～0.05mol/L醋酸钠缓冲液平衡CM-Sephadex C-50阳离子层析柱；将步骤(1)中上清液上样，用浓度范围在0～0.5mol/L NaCl的上述缓冲液梯度洗脱，检测波长：280nm，流速：0.5～1ml/min，收集3ml/管，收集活性最强的峰I，冷冻干燥；
(3)Sephadex G-75凝胶层析：用pH 7.5～8.0，0.01～0.03mol/L Tris-HCl buffer平衡Sephadex G-75柱，将步骤(2)中收集的冻干样品用相同缓冲液溶解后上样，检测波长：280nm，流速0.15ml/min，收集2ml/管，测各峰磷脂酶活性，收集活性最强的峰IV，冷冻干燥；
(4)Q-Sepharose FF预装柱层析：用pH 7.5～7.8，0.02～0.05mol/L的Tris-HC1缓冲液平衡Q-Sepharose FF预装柱，将步骤(3)中制得冻干样品用上述缓冲液溶解后上样，用浓度范围在0～0.5mol/L NaCl的上述缓冲液梯度洗脱，流速1ml/min，1ml/管，收集活性峰II，冷冻干燥即得纯品。
2.根据权利要求1所述一种白唇竹叶青蛇毒中提取磷脂酶A2的方法，其特征在于：所述步骤(1)中采用咬皿挤压法收集毒液，其中冷却离心采用3000～5000r/min离心10～15min。
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