[发明专利]稻瘟病抗性基因Pi7功能特异性分子标记Pi7FNP及其方法与应用

权利要求书

1.一种稻瘟病抗性基因Pi7功能特异性分子标记Pi7FNP，其特征在于：它由Pi7-1FNP和Pi7-2FNP组合而成；分别通过引物对SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2，以及SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4从水稻总DNA中扩增出来的核苷酸序列，并经特异性酶切之后，与稻瘟病抗性基因Pi7呈特异性带型的分子标记；

所述引物对SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2，以及SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4的核苷酸序列如下所示：

SEQ ID NO.1：5’-gcaggtcagccaagcaat-3’；

SEQ ID NO.2：5’-caaccgttgttttgcctcc-3’；

SEQ ID NO.3：5’-cgtggaagttcaacaaaagg-3’；

SEQ ID NO.4：5’-cagcacctgtattatcccat-3’。

2.根据权利要求1所述的稻瘟病抗性基因Pi7功能特异性分子标记Pi7FNP，其特征在于：所述的水稻为水稻品种IRBL7-M。

3.根据权利要求1所述的稻瘟病抗性基因Pi7功能特异性分子标记Pi7FNP，其特征在于：所述的稻瘟病抗性基因Pi7包括2个编码NBS-LRR类蛋白的基因，为如SEQ ID NO.5所示的Pi7-1和如SEQ ID NO.6所示的Pi7-2。

4.根据权利要求1～3任一项所述的稻瘟病抗性基因Pi7功能特异性分子标记Pi7FNP的检测方法，其特征在于：通过对多个水稻稻瘟病抗性基因Pi7的等位基因序列与如SEQ ID NO.5及SEQ ID NO.6所示的序列比对，分析得到能区别于其感病等位基因以及其他稻瘟病抗性基因的Pi7功能特异性的2个单碱基差异，再通过引物设计，分别得到引物SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2，以及SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4，对水稻DNA扩增，并经特异性酶切之后，分别得到Pi7功能特异性分子标记Pi7-1FNP和Pi7-2FNP。

5.根据权利要求4所述的稻瘟病抗性基因Pi7功能特异性分子标记Pi7FNP的检测方法，其特征在于包含了以下步骤：

(1)通过常规PCR法扩增，获得多个K型水稻品种的Pi7等位基因的编码区DNA序列；

(2)将步骤(1)所获得的序列比对，得到Pi7抗性基因所特异的2个功能特异性单碱基差异Pi7-1SNP和Pi7-2SNP；

(3)根据步骤(2)所得到的2个SNP，分别设计出引物对SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2，以及SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4，并用这2组引物对稻瘟病抗性水稻总DNA进行PCR扩增反应，得到扩增产物A和扩增产物B；然后分别对扩增产物进行酶切、电泳，比较验证，得到与稻瘟病抗性基因Pi7呈特异性带型的核苷酸片段Pi7-1FNP和Pi7-2FNP；

(4)对步骤(3)所获得的分子标记在不同水稻品种中进行验证，从而确定Pi7抗性基因的功能特异性的分子标记Pi7FNP，该分子标记Pi7FNP由Pi7-1FNP和Pi7-2FNP组合而成。

6.根据权利要求5所述的稻瘟病抗性基因Pi7功能特异性分子标记Pi7FNP的检测方法，其特征在于：

步骤(1)中所述的水稻品种为IRBL7-M、K60、Kusabue以及Tsuyuake。