[发明专利]适于转化细胞的载体、重组细胞及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地，涉及适于转化细胞的载体、重组细胞及其用途。更具体地，本发明提供了一组适于转化细胞的载体、两种适于转化细胞的载体、一种重组细胞及其制备方法、一种检测样本中二恶英的方法、一种用于检测样本中二恶英化合物的试剂盒、一种用于检测样本中二恶英化合物的系统以及一种筛选具有降解二恶英化合物活性的制剂的方法。

背景技术

二恶英类物质，是包括多氯代二苯并二恶英（polychlorinated dibenzo-dioxins,PCDDs）、多氯代二苯并呋喃（polychlorinated dibenzo-furans,PCDFs）和共平面多氯联苯（co-planar polychlorinated biphenyls,Co-PCBs）等一大类化合物的总称(Larsen et al,2000)，且这三类化合物分别有75种、135种、209种异构体。二恶英类污染物主要来源于有机物焚烧过程和农药、化工生产过程的副产物。因其毒性极强，自然条件下极难降解，生物蓄积性高，并对人体内分泌、生殖和发育、神经和免疫系统等都有重要影响，因此1997年被世界卫生组织国际癌症研究机构认定为人类一级致癌物。

二恶英类物质是一类全球性持久性有机污染物，普遍存在于大气、水体、沉积物和土壤等环境介质中。环境介质中二恶英类物质的含量极低，其分析属于超痕量、多组分分析，一直被视为现代有机分析的难点。

目前，对二恶英化合物进行检测的方法主要有化学检测方法和生物检测法。其中化学检测法HRGC/HRMS，虽然能够精确地将二恶英的所有成分浓度分析出来，但是整个分析测试过程费用高耗时长（检测周期>7天/样，检测成本/1.5万元），不利于日常检测和毒性急性的快速筛查。生物检测法，包括酶联免疫法（(enzyme immunoassay，EIA)、荧光免疫分析法(dissociation-enhancement lanthanide fluoro immunoassay，DELFIA)、酶活力诱导法(EROD)和荧光素酶报告基因法(chemical-activated luciferase gene expression,CALUX)等。前三者由于实验操作复杂、技术成熟度不高而难以推广应用。而CALUX法由于其准确度好、精密度高、操作简便易行而被用于欧盟、美国和日本等29个国家的水环境、土壤、食品、饲料中二恶英的检测分析和筛查。但是该法仍然有较高的假阳性，且对低浓度二恶英物质感应不灵敏，检测成本高，耗时长。

因此，目前对二恶英类化合物进行检测的方法仍有待改进。

发明内容

本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，基于二恶英类化合物的毒性机制，本发明提供了适于转化细胞的载体、重组细胞及其用途，以便改进现有的CALUX法。

根据本发明的一个方面，本发明提供了一组适于转化细胞的载体。根据本发明的实施例，该组载体包括：第一载体和第二载体。其中，第一载体包含：第一核酸序列，该第一核酸序列包括编码报告蛋白的序列，该报告蛋白具有可检测的活性；以及二恶英响应区域，该二恶英响应区域包含二恶英应答元件，并且二恶英响应区域与第一核酸序列可操作地连接。第二载体包含：第二核酸序列，该第二核酸序列包含编码芳香烃受体的序列。利用本发明的一组适于转化细胞的载体，能够有效地将编码报告蛋白的序列、二恶英应答元件以及编码芳香烃受体的序列引入宿主细胞中，从而能够有效地构建重组细胞，进而，在二恶英的诱导下，重组细胞能够启动报告基因的转录和表达，由此，利用该重组细胞能够通过所表达报告蛋白的活性的检测，有效地实现对二恶英类化合物的检测。

根据本发明的另一方面，本发明提供了一种适于转化细胞的载体。根据本发明的实施例，该载体包括：第一核酸序列，该第一核酸序列包括编码报告蛋白的序列，该报告蛋白具有可检测的活性；以及二恶英响应区域，该二恶英响应区域包含二恶英应答元件，并且二恶英响应区域与第一核酸序列可操作地连接。利用该载体，能够有效地将编码报告蛋白的序列和二恶英应答元件引入宿主细胞中，其中报告基因的转录和表达以及表达量是检测二恶英类化合物的指示，而二恶英应答元件是诱导报告基因表达的必要条件，因此，该载体适于转化细胞，能够用于构建检测二恶英类化合物的重组细胞。