[发明专利]一种适合叶际细菌和真菌PCR扩增的简便、高效DNA提取方法无效
申请号: | 201210053974.7 | 申请日: | 2012-03-05 |
公开(公告)号: | CN103289987A | 公开(公告)日: | 2013-09-11 |
发明(设计)人: | 马安周;潘建刚;齐鸿雁;庄国强;白志辉 | 申请(专利权)人: | 中国科学院生态环境研究中心 |
主分类号: | C12N15/10 | 分类号: | C12N15/10 |
代理公司: | 暂无信息 | 代理人: | 暂无信息 |
地址: | 100085 北京市海淀区*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 适合 细菌 真菌 pcr 扩增 简便 高效 dna 提取 方法 | ||
1.一种适合叶际细菌和真菌PCR扩增的简便、高效DNA提取方法。其核心是:i:叶际微生物细胞的分离和收集;ii:微生物细胞的破碎;iii:蛋白和核酸的分离;iv:蛋白抽提;v:DNA自然晾干时间适中。
2.权利要求1叶际微生物细胞的分离和收集要注意以下几点:一、磷酸缓冲液pH为7.5;二、适量的吐温-80溶液的添加;三、适中的超声波震荡的频率和时间。
3.权利要求1所述的微生物细胞的破碎方法:Fast prep振荡器在最大速度下振荡45s。
4.权利要求1所述的蛋白和核酸的分离:加适量的20%SDS溶液温浴过程中,要注意不时地轻微振荡溶液,以提高分离效果。
5.权利要求1所述蛋白抽提次数要重复2-3次,以提高杂质去除效果。而且在取上清液时,切记不要吸入中间蛋白相。
6.权利要求1所述的DNA自然晾干时间适中:务必保证酒精去处干净且DNA不易过于干燥。
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