[发明专利]一种分离鉴定核苷酰修饰的蛋白质的方法

权利要求书

1.一种检测、分离和/或鉴定可被核苷酰修饰的蛋白质的方法，所述方法包括：

(a)提供包含蛋白质的样品；

(b)使得所述样品与包含X-0/d/ddNTP、核苷酰转移酶、核酸酶、KG、ATP和Mg离子的反应体系接触，其中，X为非同位素检测标记物，0/d/ddNTP为非脱氧、脱氧或双脱氧的UTP、ATP、GTP、CTP或TTP，X-0/d/ddNTP为连接有非同位素检测标记物的非脱氧、脱氧或双脱氧的UTP、ATP、GTP、CTP或TTP，KG为α-酮戊二酸；

(c)检测、分离和/或鉴定带有非同位素检测标记物的核苷酰修饰的蛋白质。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，若样品中存在可被核苷酰修饰的蛋白质，则步骤(b)中发生如下反应：

其中，X、0/d/ddNTP、X-0/d/ddNTP、KG如权利要求1中所定义，0/d/ddNMP为与反应前的0/d/ddNTP相对应的非脱氧、脱氧或双脱氧的UMP、AMP、GMP、CMP或TMP，蛋白质-X-0/0/d/ddNMP为带有非同位素检测标记物的0/d/ddNMP修饰的蛋白质。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述包含蛋白质的样品选自：新鲜的、冷冻干燥的或固定的细胞、组织、器官、或其分离物或裂解物；合成或半合成的蛋白质样品。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，X为选自下组的非同位素检测标记物：荧光标记物、化学发光标记物或生物发光标记物，优选X为DIG、生物素、亲和素、链霉亲和素、中性亲和素、抗生物素、凝集素或葡萄球菌A蛋白。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，X-0/d/ddNTP在反应体系内的浓度为1.0～5μM，优选0.5～2.5μM，更优选1μM。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述反应体系先在适于核苷酰转移酶作用的温度下反应15～120分钟，再在适于核酸酶作用的温度下反应15～120分钟。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述检测、分离和/或鉴定是通过选自下组的一种或多种方法进行的：免疫印迹法、亲和层析、SDS-PAGE、ELISA或免疫沉淀。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还包括在步骤(b)前对所述样品进行前处理。

9.一种检测、分离和/或鉴定可被核苷酰修饰的蛋白质的试剂盒，所述试剂盒包括：

(i)容纳X-0/d/ddNTP的容器，所述容器可任选容纳KG、ATP、核苷酰转移酶、核酸酶和/或Mg离子中的一种或多种，其中X、0/d/ddNTP、X-0/d/ddNTP、KG如权利要求1中所定义；

(ii)任选的，容纳KG、ATP、核苷酰转移酶、核酸酶和/或Mg离子中的一种或多种容器；

(iii)任选的，洗液、缓冲液和/或助剂；

(iv)任选的，检测、分离和/或鉴定带有非同位素检测标记物的核苷酰修饰的蛋白质所需的试剂；以及

(iv)任选的，产品说明书。

10.X-0/d/ddNTP在检测、分离和/或鉴定可被核苷酰修饰的蛋白质中的用途，其中，X为非同位素检测标记物，0/d/ddNTP为非脱氧、脱氧或双脱氧的UTP、ATP、GTP、CTP或TTP，X-0/d/ddNTP为连接有非同位素检测标记物的非脱氧、脱氧或双脱氧核苷三磷酸。