[发明专利]布氏杆菌特异性多表位人工多肽的特异性抗体及其包被的免疫磁珠和应用

说明书

技术领域

本发明属于生物检测领域，涉及布氏杆菌特异性多表位人工多肽的特异性抗体及其包被的免疫磁珠和应用。

背景技术

布氏杆菌病(Brucellosis)是重要的人兽共患细菌性传染病。布氏杆菌(Brucella)感染多种家畜、野生动物引起的发热、流产、不孕不育、关节疾患、神经损害，由此造成家畜的使役性能、生产性能降低，导致了畜牧业巨大的经济损失；布氏杆菌还能感染人，造成人的急、慢性布氏杆菌病，该病已成为畜牧兽医从业人员、实验室相关病原研究人员、牲畜屠宰、乳肉品皮毛加工及动物饲养人员等最常见的职业性疾病，形成了严重的公共卫生问题。

Brucella传统分离培养方法需要在预增菌培养液中连续培养6周，每周在固体选择性培养基上作继代培养，耗时长，并且每次继代培养的取样量较少，划线培养后，一些杂菌快速摄取培养基中的有效营养成分，严重干扰Brucella的分离培养，造成传统分离方法的敏感性和检出率降低；酶联免疫吸附试验(ELESA)、核酸探针杂交、聚合酶链式反应(PCR)、实时定量PCR(Real-time PCR)等方法敏感、特异、且检出率较高，但存在一定的非特异性反应，不能区分活菌和死亡细菌。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的上述不足，提供一种布氏杆菌特异性表面蛋白多抗原表位串联表达后制备的人工多肽及其特异性抗体。

本发明的另一目的是提供包被有该抗体的免疫磁珠。

本发明的又一目的是提供该免疫磁珠的应用。

本发明的目的可通过如下技术方案实现：

布氏杆菌异性表面蛋白多抗原表位串联表达后制备的人工多肽，是由人工分析布氏杆菌特异性表面蛋白的抗原表位，人工设计、改造、串联、表达后获得，其氨基酸序列为SEQ ID No.1，编码所述含布氏杆菌特异性表面蛋白多抗原表位的核苷酸序列为SEQ ID No.2。

一种布氏杆菌特异性抗体，该抗体是由所述的含布氏杆菌特异性表面蛋白多抗原表位的人工多肽免疫成年新西兰兔获得的布氏杆菌特异性抗体。

由所述的布氏杆菌特异性抗体包被的免疫磁珠。

一种利用所述的试剂盒富集检测布氏杆菌的方法，按如下步骤进行：

(1)样品的预增菌依据SN/T 1088-2010进行，样品加入预增菌培养液后，在微需氧条件(5％氧气、10％二氧化碳、85％氮气)下，36±1℃培养7d；也可用等效的方法进行预增菌；

(2)取所述预增菌液20-30mL，加入所述的布氏杆菌特异性抗体包被的免疫磁珠50μL，37℃孵育1h；

(3)将其放于磁力架上，3min后弃去上清，加入30mL PBS缓慢重悬，磁力架吸下免疫磁珠后，弃去上清，如此重复洗涤3次；

(4)吸附后的免疫磁珠直接铺于选择性平板(如：双向选择Castaneda氏培养基)上进行分离培养，或直接提取吸附后的免疫磁珠上的DNA用PCR或荧光PCR进行检测；为避免免疫磁珠上抗体影响菌落的生长状态，可以向吸附后的免疫磁珠中加入1mL 50mmol/L甘氨酸溶液(pH2.0)，间断振荡洗脱1h；将离心管放于磁力架上，待免疫磁珠全部被吸附于管壁上时取出上清，用洗脱下的菌液直接铺于选择性平板上进行分离培养，或直接提取DNA后用PCR或荧光PCR进行检测。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

本发明选择布氏杆菌3个位于菌体表面的特异性蛋白各选取一个抗原性较强的表位，人工设计出一条布氏杆菌特异性多表位人工多肽，并利用纯化的多肽作为抗原免疫新西兰兔，获得的布氏杆菌特异性多表位人工多肽的特异性抗体对布氏杆菌具有良好的特异性。与常规方法相比，本发明布氏杆菌特异性多表位人工多肽的特异性抗体包被的免疫磁珠可以从体积较大的样品预增菌液中将布氏杆菌富集，极大地提高下一步分离培养或PCR检测的敏感性；并且本发明布氏杆菌特异性多表位人工多肽的特异性抗体包被的免疫磁珠能够特异性地吸附样品预增菌液中布氏杆菌，可排除其它杂菌对下一步的分离培养或PCR检测的干扰，以提高布氏杆菌的检出率。由于磁珠包被有特异性抗体，富集效果及效率大大提高，磁珠与细菌结合是通过非共价键结合，不会影响布氏杆菌的生理和生化特性。利用该免疫磁珠或试剂盒能从样品预增菌液中将布氏杆菌富集，极大地提高下一步分离培养或PCR检测的敏感性和检出率，具有特异性好，灵敏度高，简单，方便，快速，适合大规模样品检测的优点。

具体实施方式

实施例1