[发明专利]一种发酵后高产乳酸的地衣芽孢杆菌及其制剂和应用

说明书

技术领域

本发明涉及微生物应用领域，具体地，涉及一种发酵后高产乳酸的地衣芽孢杆菌及其制剂和应用。

背景技术

地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)是我国农业部2008年1126号公告批准使用的饲料级菌株之一。地衣芽孢杆菌属于能够产生芽孢的兼性厌氧微生物。菌体繁殖速度快、抗逆性强，并且能分泌蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶以及多种氨基酸。与乳酸菌和双歧杆菌等相比，芽孢杆菌的优点在于它对外界不良环境有很强的抵抗力，与同为芽孢杆菌的枯草芽孢杆菌相比，地衣芽孢杆菌生长温度高5～7℃；其次，其生长速率适中，容易使刚跨膜的未合适折叠的蛋白充分折叠；此外，地衣芽孢杆菌分泌蛋白至培养基中的能力大约是枯草芽孢杆菌的2倍，异源蛋白表达水平已报道达到20～25mg/mL，为所见报道的所有芽孢杆菌中表达水平最高者。地衣芽孢杆菌治疗下痢和腹泻效果很好，是制造微生态制剂的理想菌株。在我国，沈阳第一制药于1992年上市销售的“整肠生”，其主要成分就为地衣芽孢杆菌，抗腹泻效果显著，而且无副作用。

目前芽孢杆菌的生产工艺主要有两种：固体发酵法和液体发酵法。固体发酵法产量低，劳动强度大，易污染，但投资较少。目前国内许多小规模的芽孢杆菌生产厂家多采用这种生长方式，生产水平参差不齐，产品活菌数从每克几十亿到几百亿不等。液体发酵工艺具有产量大、机械化程度高、易于监控、深层发酵转化率高的优点，但是设备投资高，动力消耗较大。这种生产方式产品质量稳定，通过离心浓缩得到的芽孢杆菌产品，其活菌数最高可以达到每克一万亿以上。

CN101986865A公开了一种地衣芽孢杆菌的制备方法，采用三级液体深层发酵，连续补料分批发酵，芽孢率可以达到90％以上。液体发酵易于控制，减少污染，但是该专利并未披露利用该技术发酵的地衣芽孢杆菌的活菌数。专利CN1202522A公开了一株地衣芽孢杆菌及其微生态制剂，该法利用固体发酵法或者液体发酵法发酵地衣芽孢杆菌，操作简单，易于实现，但是该法属于实验室研发阶段，不利于大生产的推广。专利CN102021131A公开了一种地衣芽孢杆菌液体制剂的制备方法，液体深层发酵，活菌数2×10⁹CFU/mL时，获得所需要的发酵液，该法制备属于典型的液体发酵，发酵液可用来防治西瓜枯萎病；液体发酵法不易染菌，但是该工艺制备的活菌数较低。专利CN102120972A公开了一种地衣芽孢杆菌的制备方法，该法采用三个温度梯度对地衣芽孢杆菌冻干菌粉进行复苏，复苏后的地衣芽孢杆菌经斜面、三角瓶、发酵罐后制备发酵液，发酵液经60±2℃热风循环烘干，经过三级复苏后制备的地衣芽孢杆菌菌粉，活菌数高，而且该发酵法后处理操作简单，但是热烘干耗时太长，活菌数损失较大。王新磊等(2010)研究了地衣芽孢杆菌转化淀粉生产乳酸的发酵条件，优化后产乳酸量高，产酸速率快，但没有披露活菌数及芽孢形成率。

发明内容

为了解决上述问题，本发明的发明人提出并完成了本发明。

本发明的目的是提供一种发酵后高产乳酸的地衣芽孢杆菌CRVAB001。

本发明的另一目的是提供一种微生态液体制剂。

本发明的另一目的是提供上述微生态液体制剂的制备方法。

本发明的另一目的是提供一种微生态粉剂。

本发明的另一目的是提供上述微生态粉剂的制备方法。

本发明分离筛选出一种产乳酸的地衣芽孢杆菌，命名为地衣芽孢杆菌CRVAB001(Bacillus licheniformis)。该菌株于2011年5月17日保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，100101)，其保藏编号是：CGMCC No.4850。

本发明提供了一种微生态液体制剂，包含上述的地衣芽孢杆菌CRVAB001。

本发明还提供了上述微生态液体制剂的制备方法，包括以下步骤：

1)菌体一级斜面培养：将地衣芽孢杆菌CRVAB001接种于斜面培养基培养，于30～45℃下培养18～36小时获得菌体一级斜面；

2)菌体二级液体培养：将步骤1)所得菌体一级斜面接种于液体培养基培养，在30～45℃、150～250r/min的条件下培养得到地衣芽孢杆菌液，菌数≥1.0×10¹⁰CFU/mL时停止培养，获得菌液；