[发明专利]一种发酵后高产乳酸的地衣芽孢杆菌及其制剂和应用

权利要求书

1.一种发酵后高产乳酸的地衣芽孢杆菌CRVAB001(Bacillus licheniformis)，其特征在于，保藏编号为：CGMCC No.4850。

2.一种微生态液体制剂，其特征在于，包含权利要求1所述的地衣芽孢杆菌CRVAB001。

3.一种微生态液体制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)菌体一级斜面培养：将保藏编号为CGMCC No.4850的地衣芽孢杆菌CRVAB001接种于斜面培养基培养，获得菌体一级斜面；

2)菌体二级液体培养：将步骤1)所得菌体一级斜面接种于液体培养基培养，活菌数≥1.0×10¹⁰CFU/mL时停止培养，获得菌液；

3)菌体三级种子液培养：将步骤2)所得菌液接种于液体培养基培养，活菌数≥1.0×10¹⁰CFU/mL时停止培养，获得种子液；

4)液体发酵：将步骤3)所得种子液接种于发酵培养基中，采用需氧—厌氧转换发酵，发酵开始的前6小时通气比为1∶0.8，7～14小时通气比为1∶1，活菌数≥1×10¹⁰CFU/mL，芽孢形成率达到90％以上，乳酸含量≥30g/L，停止发酵，收集发酵液，获得微生态液体制剂。

4.根据权利要求3所述微生态液体制剂的制备方法，其特征在于，所述液体培养基配方为：按重量百分比计算，玉米粉0.5％～4.0％、豆粕0.5％～2.0％、鱼粉0.1％～0.5％、葡萄糖0.1％～1.0％、硫酸镁0.01％～0.1％、硫酸锰0.01％～0.05％，水余量，pH 7.0～7.5。

5.根据权利要求3所述微生态液体制剂的制备方法，其特征在于，所述液体培养基配方为：按重量百分比计算，葡萄糖5％～10％、玉米浆0.03％～0.07％、硫酸铵0.05％～0.20％、MgSO₄ 0.01％～0.03％、FeSO₄ 0.001～0.003％、NaCl 0.1％～0.5％、CaCO₃ 1％～5％、KH₂PO₄ 0.06％～0.16％、水余量。

6.一种微生态粉剂，其特征在于，包含权利要求1所述的地衣芽孢杆菌CRVAB001。

7.一种微生态粉剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)菌体一级斜面培养：将保藏编号为CGMCC No.4850的地衣芽孢杆菌CRVAB001接种于斜面培养基培养，获得菌体一级斜面；

2)菌体二级液体培养：将步骤1)所得菌体一级斜面接种于液体培养基培养，活菌数≥1.0×10¹⁰CFU/mL时停止培养，获得菌液；

3)菌体三级种子液培养：将步骤2)所得菌液接种于液体培养基培养，活菌数≥1.0×10¹⁰CFU/mL时停止培养，获得种子液；

4)液体发酵：将步骤3)所得种子液接种于发酵培养基中，采用需氧—厌氧转换发酵，发酵开始的前6小时通气比为1∶0.8，7～14小时通气比为1∶1，活菌数≥1×10¹⁰CFU/mL，芽孢形成率达到90％以上，乳酸含量≥30g/L，停止发酵，收集发酵液；

5)盐析：向步骤4)所得发酵液中加入1％～5％(g/mL)磷酸氢二钠、1％～5％(g/mL)氯化钙、1％～5％(g/mL)氢氧化钠的水溶液，搅拌；

6)向步骤1)的溶液中加入助滤剂，搅拌，静置，过滤，获得滤饼，经干燥获得微生态粉剂，

其中，所述助滤剂为，按重量百分比计算，1％～6％轻质碳酸钙、1％～5％珍珠岩和1％～5％硅藻土中的一种或几种。

8.权利要求2所述微生态液体制剂作为饲料添加剂及在改善养殖水体环境方面的应用。

9.权利要求7所述微生态粉剂作为饲料添加剂及在改善养殖水体环境方面的应用。