[发明专利]中药材中邻苯二甲二丁酯的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种在中药材中邻苯二甲酸二丁酯采用气相色谱的检测方法，属于分析测试领域。

背景技术

邻苯二甲酸酯类(PAEs)是增塑剂的主体。因增大产品的可塑性和柔韧性而广泛地应用于日常生活中。过去一直认为PAEs毒性低，但近年来对动物毒性试验的研究结果表明，PAEs具有生殖毒性、胚胎毒性和遗传毒性等，尤以人体生殖功能异常最为引人注目。由于PAEs在环境中残留期较长，生物对其有富集作用，我国已将PAEs家族中的邻苯二甲酸二甲酯(DMP)、邻苯二甲酸二乙酯(DEP)和邻苯二甲酸二正辛酯(DNOP)确定为环境优先控制污染物。《国家饮用水标准》(GB5749-2006)要求DEHP＜0.008mg/L，DBP＜0.003mg/L，DEP＜0.3mg/L。

目前，国内外对食品塑料包装材料中PAEs分析比较重视，研究的较多，主要以提高检测效率，其中前处理技术主要有固相萃取(SPE)净化、超临界萃取(SFE)，凝胶色谱(GPC)、加速溶剂萃取(ASE)、净化体积阻滞色谱(SEC)；测试技术主要采用气相色谱法(GC)、气相色谱-质谱法(GC-MS)、液相色谱法(HPLC)、液相色谱-质谱法(LC-MS)等。但在中药材化学成分研究中偶见酞酸酯类环境激素的报道，对其来源及限量要求未见阐述。人们长期服用含有此类环境激素的食品或中药材，可能构成潜在的远期危害，由于药品的服务对象还不同于食品，所以更应该引起重视。

由于邻苯二甲酸酯类物质具有较高极性、低挥发及不活泼特性，且在模拟迁移介质中的含量较低，给HPLC、LC-MS、GC和GC/MS带来难度；另外，GC-MS和LC/MS，设备昂贵，成本高，很难在基层实验室推广应用。

因此，建立适于基层实验室药材中PAEs的测定方法是非常必要的。本发明采用GC-FID测定中药材中的DBP，以满足基层实验室检测的需求，扩大样本量，探明其来源及解决办法，及早制定限量标准。本发明利用GC方法的灵敏度高，分离效果好，定量准确，但为克服邻苯二甲酸酯类物质的缺点，本法对样品采用超声辅助提取，进行二次净化的办法，即采用二氯甲烷-水相液液分配净化以除去水溶性杂质，后再经ODS-C₁₈固相柱除去少部分脂溶性杂质的净化方法，并保证了本方法具有良好的精密度和重现性。

目前食品包装袋中邻苯二甲酸酯的检测方法及其相关研究较多，而对中药材中邻苯二甲酸二丁酯的研究未见报道。

发明内容

为了检测在中药材中常见增塑剂污染状况，本发明提供一种涉及邻苯二甲酸二丁酯在中药材中采用气相色谱检测方法。该方法简捷、快速，准确、灵敏，检测限和适用范围完全满足目前检测限量的要求。具体检测步骤如下：

(1)样品溶液的制备

称取粉碎后中药材5.00g(40目)，放入100mL圆底烧瓶中后加入二氯甲烷浸泡0.5h，超声振荡15-35min，然后在60℃下回流，1h，提取2次，合并提取液，浓缩至原体积的1/4～1/6，加水分散萃取，萃取液经无水硫酸钠脱水，过滤，浓缩。吸取1mL样品萃取液过预先用二氯甲烷活化过的500mg/3mLODS固相萃取柱进行浓缩富集，上样完毕后，用3mL二氯甲烷洗脱，洗脱速率为1mL/min，用10mL氮吹管收集洗脱液，氮吹浓缩至1mL，过0.45μm的一次性针筒式微膜过滤器，气相色谱直接进样分析。

二氯甲烷体积的加入根据药材的性质，以药材应完全浸入溶剂中为准。

(2)色谱条件

色谱柱为HP-5，进样口温度为270-290℃，FID温度为290-310℃。柱温：采用程序升温，柱箱初始温度150℃保持3.0min，以20.0℃/min升温到200℃，保持30.0min。载气：N₂，流量为1.8-2.2mL/min；进样方式：不分流进样，进样体积为1.0μL。

(3)邻苯二甲酸二丁酯储备液的制备

精密称取DBP，至10mL容量瓶，用二氯甲烷定容，置于冰箱中4℃保存备用。标准储备液可以保存6个月。

(4)标准曲线的制备

以二氯甲烷为溶剂，采用逐级稀释的方法配制标准使用液，浓度系列为1.0000～10.0000mg/mL。在选定的色谱条件下，进样1.0μL，分别以DBP的色谱峰面积(Y)与浓度(X)作标准曲线。标准曲线回归方程为y＝1860.3x+722.3，相关系数为0.99993。

(5)定性分析按照(1)确定的分析条件，对DBP标准溶液进样测定，以保留时间作为定性依据。

(6)精密度试验