[发明专利]一种快速鉴别牛羊肉的试剂盒与使用方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种快速鉴别牛羊肉的试剂盒和使用方法，属于食品检测领域。

背景技术

改革开放以来，我国的肉牛产业得到了迅速的发展，经过20多年的快速发展，从二十世纪九十年代开始，我国肉牛存栏数量跃居世界第一位，牛肉产肉跃居世界第三位。在这20多年里，我国的经济也取得了年均9％以上的高速发展，人们生活水平迅速提高，对牛肉的需求快速增加。正是由于肉牛产业的这种快速发展，才满足了国内对牛肉快速增长的需求，牛肉价格也稳步提高。1999年我国的肉牛数量到达了发展的顶峰，此后，由于受到农村机械化的推广和普及，与外出打工等相比肉牛养殖的比较效益下降，肉牛的存栏数量开始呈逐年下降的趋势，但牛肉产量仍保持小幅上升的趋势。同期，我国的经济仍保持高速增加，人们生活越来越富裕，对牛肉的需求进一步快速增长。此时，仅依靠国内的肉牛产业已经无法满足对牛肉的需求，刺激牛肉价格进一步上涨，2011年普通牛肉达到了40-45元/千克的历史最高点，优质牛肉价格普遍在200元/千克以上，最高价格达到了1000-2000元/千克。

牛肉价格的飞速上涨和短缺导致国外的牛肉大量通过走私等途径进入中国，同时，国内也出现了很多不和谐的现象，2011年4月份安徽首次曝光了利用牛肉膏等添加剂使猪肉变牛肉的事件，此后，在全国多个省市均发现了类似的产品。一时间，人们对牛肉等食品安全的关注成为了全社会的焦点。其实，牛肉市场面临的猪肉变牛肉事件仅是冰山的一角。在社会上还大量存在着用鸡肉、鸭肉等低价肉甚至是一些病死肉加工冒充牛肉的现象。目前社会上销售的低价牛肉和牛肉片，几乎都是非牛肉加工而成。因为目前活牛的价格已经达到18-20元/千克，而每千克活牛只能出0.4-0.5千克牛肉，因此，每千克牛肉至少要达到36元以上才有可能盈利。屠宰场和销售商不可能赔钱赚吆喝。羊肉由于其价格高于普通牛肉，其市场面临着与普通牛肉完全一样的情况。

面对牛羊肉市场存在的乱象，人们只能从色泽、气味、弹性等多个方面进行初步鉴别，但大多数消费者都不可能掌握这种专业知识，很难对生牛肉进行鉴别，对加工后的牛肉则更是难以鉴别。目前社会上缺乏牛羊肉的准确鉴别技术。通过现代化的DNA鉴定技术，可以进行鉴别。早在2008年新华每日电讯就报道过杭州一个市民买10元牛肉花2800元进行DNA鉴定的事件，2010年中新网报道了宁波一个消费者花1800元通过DNA亲子鉴定技术鉴别牛肉真假的事件，表明这种方法虽然能够鉴别，但所需时间长，费用高。因此，迫切需要建立一种简单、快速、廉价的牛羊肉鉴别技术，以维护牛羊肉市场的安全，保护广大消费者的身体健康。

发明内容

本发明的目的是针对国内外已有方法在检测技术上存在着操作复杂、耗时、重复性低、检测成本高等不足之处，在检测技术上加以改进。动物线粒体DNA编码序列具有高度保守性，对于物种的鉴定具有很高的可信度和准确性。环介导等温扩增技术(LAMP)是由日本学者Notomi T等(2000)设计创立的，这种新型核酸扩增技术具有灵敏度高、反应迅速，特异性强等优点。本发明利用LAMP技术和动物线粒体DNA相结合对牛羊肉进行鉴定，整个反应可在恒温状态下经过1h就可完成，而且可以通过肉眼观察到反应结果。

本发明的技术方案是：一种快速鉴别牛羊肉的试剂盒，包含以下组分：

(1)反应液：每23μL的反应液中含有：12.5μL 2×等温反应缓冲液、1μL5μM Primer F3、1μL 5μM Primer B3、2μL 20μM Primer FIP、2μL 20μM PrimerBIP、1μL Bst DNA聚合酶、3.5μL水，其中：

PrimeμF3(Forward Outer F3)：AACAGCTTAAAACTCAAAGGA(SEQ NO.1)

Primer B3(Reverse Outer B3)：AGCCCATTTCTTCCCATT(SEQ NO.2)

Primer FIP(Forward Inner FIP)：TGAGGTTTATCGGGGTTTATCGAGG CGGTGCTTTATATCCTT(SEQ NO.3)

Primer BIP(Reverse Inner BIP)：CGCCATCTTCAGCAAACCCTGTTACA CCTTGACCTAACGT(SEQ NO.4)

2×等温反应缓冲液含有40mM的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐Tris-HCl(pH8.8)、20mM的氯化钾、16mM的硫酸镁、20mM的硫酸铵、20％的Tween20、1.6M甜菜碱、2.8mM dNTP。