[发明专利]一种沙丁胺醇酶联免疫试剂盒及其使用方法

权利要求书

1.一种沙丁胺醇酶联免疫试剂盒，其特征在于：组成如下：

包括包被板、校准品、酶标记物工作液、底物液A、底物液B、终止液、浓缩洗涤液，浓缩提取液，

所述包被板为孔底包被有抗沙丁胺醇多克隆抗体；包被量为1μg/ml，包被温度4℃过夜；

所述校准品为不同浓度的系列校准品；

所述酶标记物工作液含有标记HRP的盐酸克伦特罗半抗原，为过碘酸钠法将HRP同盐酸克伦特罗半抗原结合；

所述底物液A为过氧化氢脲溶液、B为TMB溶液；

所述终止液为2M硫酸。

2.根据权利要求1所述的沙丁胺醇酶联免疫试剂盒，其特征在于：所述浓缩洗涤液为20X浓缩洗涤液，使用前以蒸馏水按照1∶19v/v的比例稀释，混匀后使用。

3.根据权利要求1所述的沙丁胺醇酶联免疫试剂盒，其特征在于：所述浓缩提取液20X浓缩提取液，使用前以蒸馏水按照1∶19v/v的比例稀释，混匀后使用。

4.根据权利要求1所述的沙丁胺醇酶联免疫试剂盒，其特征在于：所述包被板的包被步骤如下：

A)抗体包被：用抗沙丁胺醇多克隆抗体最佳包被浓度包被酶标板，100ul/孔，4℃过夜，最佳包被量为1μg/ml，0.05M pH9.6 CBS作为稀释液用于包被固相载体；

B)洗板：将孔内液体甩干，用洗涤液250μl/孔充分洗涤4-5次，每次间隔10s，用吸水纸拍干；

C)封闭：将1％BSA+10％sucrose封闭液加入酶标板，100ul/孔，37℃温育2小时，将孔内液体甩干，用吸水纸拍干，真空干燥，加铝箔袋真空封装。

5.一种如权利要求1所述的沙丁胺醇酶联免疫试剂盒的使用方法，其特征在于：步骤如下：

(1)将所需试剂从冷藏环境中取出，置于室温平衡30min以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀；

(2)取出需要数量的微孔板，将不用的微孔板放入铝铂袋，保存于2-8℃；

(3)洗涤液在使用前也需回温；

(4)编号：将样本和校准品对应微孔按序编号，每个样本和校准品做2孔平行，并记录校准孔和样本孔所在的位置；

(5)加校准品/样本：加入校准品/样本50μl到对应的微孔中，随即加入酶标记物50μl/孔，轻轻振荡混匀，用封板膜封板后置25℃避光环境中反应30min；

(6)洗板：小心揭开封板膜，将孔内液体甩干，用洗涤液250μl/孔充分洗涤4-5次，每次间隔10s，用吸水纸拍干；

(7)显色：加入显色液100μl/孔，底物A液和底物B液1∶1混匀，轻轻振荡混匀，用封板膜封板后，置25℃避光环境中反应15min；

(8)测定：加入终止液50μl/孔，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处，测定每孔OD值；

(9)结果：所获得的校准和样品吸光度值的平均值除以第一个校准的吸光度值再乘以100。