[发明专利]便捷的乳制品病原体检测方法

说明书

技术领域

本发明属于微生物检测技术，尤其是涉及乳与乳制品中病原微生物的现场定性检测技术，具体为一种乳制品病原体检测方法。

背景技术

民以食为天，食以安为先。充足、营养和安全的食品是人类生存的基本需要。尽管科技进步显著降低了疾病对人类的危害，但食源性疾病仍是人类健康和生命的主要威胁之一。近年来疯牛病、禽流感、李斯特杆菌、猪链球菌等重大食品危害事件的频频爆发，也促使全球对食品安全的问题越来越重视。在美国，由于食品病原问题每年导致7,600万人生病，32万人住院，5,000人由于食品卫生而死亡，并为此每年支出65亿美元。而国内，我国发生的几起重大食物中毒事件都与微生物致病污染有关。如河南郑州市某高校发生鸡肠球菌污染食品引起367人集体食物中毒；山东省夏津县一起鼠伤寒沙门菌污染食物引起153人食物中毒事件；2005年四川的猪链球菌事件更是造成38人死亡，近200人中毒。诸多案例表明食源性病原菌常造成群发性的伤害，给人们的身体健康及生命财产造成相当的危害。2008年的‘奶粉事件’，乳制品中的三聚氰胺超标，更是将食品安全检测推向了高潮，由此引发了食品检测的革命风暴。中国食品业在经历了2008年的牛奶之觞后，度过了较为平静的一年，但年终岁尾的“问题奶粉”又死灰复燃，可口可乐“雪碧含汞”，“主食转基因”安全问题引起全民激辩，春节期间，海南毒豇豆席卷全国……种种食品安全问题，使得人人自危。食品安全问题再次敲响了警钟！2010年2月9日，食品安全委员会成立，三位副总理携15部长共保食品安全。中共中央政治局常委、国务院总理温家宝27日下午3时接受中国政府网、新华网联合专访，与广大网友在线交流。在回答网友提出的“毒奶粉”等假冒伪劣产品时，温家宝说，对于整个社会来讲，道德问题十分重要，“我以为诚信和道德是现代社会应该解决的紧迫问题″，然而光有道德约束远远不够，我们不仅要制订详细的法律来约束不法商家的违法行为，更要有快捷、经济的检测方法，用于随时随地检测各种问题食品。

目前用于检测乳制品中的病原体检测的国家标准有平板法、免疫法、real time PCR法，然而随着人们生活水平的提高，对乳制品的检测要求也不断的提高。传统的一些检测方法，虽然一直作为国家标准，但其缺陷也日益显现。

首先，平板法需要很长时间，一般为六七天，而一些急于出售的乳制品，无法等待如此长的时间，待检测完毕，拿到检测报告后，该批次的乳制品就会由于旋转时间过长而过保质期；对一些表型特征变异的菌株，用传统的形态学经验很难辨别，受主观的经验影响较大。其次，目前一些养殖场为了逃避病原体检测，往往会给奶牛喂养一些含抗生素的饲料，导致在原奶中有较高的抗生素含量，从而平板法就会由于有抗生素的干扰，从而不能顺利检测到病原体的存在。再次，一个平板只能检测一个样本的一种病原体，一旦待测样本数很多，平板法则根本没办法满足，只能进行抽检，这样就会导致漏检率大大升高。

免疫法依赖抗原抗体的特异性反应来检测目的样本中的病原体，因此，实验的灵敏度很大程度上依赖于抗体的好坏：一方面，制作抗体是一个耗时耗力的工作，而且即使抗体制作的再好，也会由于抗原表面决定簇类似的原因，使结果出现交叉反应；另一方面，有些病原变异极快，如病毒，或者一些菌属，存在很多的亚型，并且经常变异，从而使抗体失效，不能检测新的抗原。有些乳制品中加了一些色素，因此，由于免疫法是利用酶标仪的光吸收来判定结果的，因此，本底色过高，就很容易造成假阳性结果。

Real time PCR是国家标准上唯一的一个基于核酸扩增的方法，不会受本底色和抗生素的干扰，结果也较为可靠，然而最大的缺点就是通量较低，一个反应只能检测一种病原，一旦要检测多个病原，就需要多台PCR来完成，一旦有大量样本，就不能及时完成所有检测工作。同时该方法还需要昂贵的定量PCR仪，只能限定于实验室检测，不能走入寻常百姓家。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种便捷的乳制品病原体检测方法，采用该方法无需复杂的仪器，并且用肉眼即可辨识检测结果，从而准确判断是否被病原体污染。

为了解决上述技术问题，本发明提供一种便捷的乳制品病原体检测方法，包括以下步骤：

1)、设计引物：

设计大肠菌群、乳酸菌、沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌、霉菌的对应引物组各一套；每套引物组中含有4条引物；

2)、待测液态乳制品的前处理，依次进行以下步骤：

①、将待测液态乳制品于3～5℃下1000-2000rpm离心15～25min，弃上层悬浮物；