[发明专利]大肠埃希菌中emrE基因的检测引物及其检测方法

权利要求书

1.大肠埃希菌中emrE基因的检测引物，其特征在于，包括：

(A).emrE基因正向引物：5′-tggccatctgttggtacaat-3′；

(B).emrE基因反向引物：5′-ggcacaaatcaacatcatgc-3′。

2.一种大肠埃希菌中emrE基因的检测方法，其特征在于，采用权利要求1所述的大肠埃希菌中emrE基因的检测引物，具体步骤为：

第一步：取经培养后鉴定为大肠埃希菌阳性的临床样本分离株，高温灭活，提取样本DNA，作为检测样品；取不携带emrE基因的大肠埃希菌菌株，高温灭活，提取样本DNA，作为阴性对照品；人工合成emrE序列，构建携带emrE基因的重组质粒为阳性对照品；

第二步：用无菌水配制浓度为5-15umol/L的emrE基因正向引物溶液，浓度为5-15umol/L的emrE基因反向引物溶液以及浓度为5-15umol/L的emrE基因检测探针溶液；emrE基因正向引物的序列为：5′-tggccatctgttggtacaat-3′，emrE基因反向引物的序列为：5′-ggcacaaatcaacatcatgc-3′，emrE基因检测探针的序列为：FAM-cggccaacggctgga-MGBNFQ；

第三步：在每一个PCR反应孔中依次加入PCR Master Mix 10-15ul和第二步所得的emrE基因正向引物溶液0.1-1ul、emrE基因反向引物溶液0.1-1ul、emrE基因检测探针溶液0.1-1ul，然后在不同的PCR反应孔中分别加入第一步得到的检测样品、阴性对照品及阳性对照品0.1-1ul，用灭菌重蒸馏水补足25ul；在荧光定量PCR仪上进行反应，反应条件为40-60℃保温1-3分钟，80-100℃保温1-3分钟，再运行30-50个循环，每个循环包括在80-100℃保温10-20秒，再在50-70℃保温0.5-1.5分钟；

第四步：用软件SDS2.2进行结果分析，PCR结果呈S形曲线即为携带emrE基因。