[发明专利]一种具有抗糖尿病肾病作用的香椿子提取物制备方法

说明书

技术领域

本发明属于中药提取技术领域，是一种从香椿子中提取抗糖尿病肾病作用的极性部位的方法。

背景技术

糖尿病肾病(Diabetic nephropathy，DN)是糖尿病 (diabetes mellitus，DM)患者常见而难治的远期慢性微血管并发症之一，也是引起DM患者死亡的重要原因。目前我国DM患者达4000余万，DN发病率逐年递增，临床上40%～50%的1型、10%～20%的2型DM患者伴有明显的DN，约1/3患者发展为晚期DN和终末期肾脏病，已成为严重威胁人类生命健康的疾病。迄今医学界尚无有效治疗方法阻止DN发生与发展，近年来中药在DN治疗方面倍受关注并取得了一定成绩。

香椿子，性温，味辛苦，无毒，入肝、肺经，具祛风、散寒、止痛功效，主治风寒外感、心胃气痛、风湿关节痛、疝气等。香椿分布于华北、西北、西南、华东等地，尤以山东、河北两省为多。香椿以栽植最多，加上广泛分布的野生香椿，整体资源非常丰富。山东省临沂、聊城等地区群众使用香椿子泡水或煎服，对DN具有较好疗效, 属于民间用药。美国专利（US2005175716）提及香椿子中含有治疗DM的天然活性成分，加之香椿子较低的使用毒性，所以香椿子不失为一种具有市场潜力的防治DN的物质来源。

香椿是一种用途较广、来源丰富、成本低廉、药食两用的植物, 具有很好的开发利用价值。目前已发现香椿子具有降血糖、抗氧化、抗凝血、抗血栓、提高纤溶活性、保护心肌缺血再灌注损伤、改善心肌缺血再灌注的血流动力学变化、保护神经细胞、保护活化和损伤的内皮细胞等作用。香椿子药理研究相对较少，尤其是香椿子提取物在抗DN作用方面尚未见报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种具有抗DN作用的香椿子提取物，为解决此问题，从香椿子的不同极性部位入手，运用动物模型筛选抗DN作用的有效部位。

由于香椿子成分复杂，有些成分本身可能无活性，但经体内代谢所得产物具备活性，故寻找香椿子中抗DN作用的极性部位宜采用动物模型筛选，即应用雄性Wistar大鼠，注射链脲佐菌素（STZ）建立DN模型，观察香椿子不同极性部位对DN大鼠肾脏的保护作用，从而筛选香椿子中治疗DN的物质基础。

为了达到上述目的，本发明通过下列措施实现：

⑴ 称取干燥香椿子，粉碎，分别用8倍量55%～95%乙醇热回流提取3次，每次2小时，过滤后合并提取液，减压浓缩至无醇味。

⑵ 浓缩液以水混悬，依次用石油醚( 60～90℃)、乙酸乙酯、正丁醇萃取，萃取剩余的部分为水部分。

⑶ 分别减压回收溶液至干，依次得到香椿子的石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位与水部位。

⑷ 运用动物模型筛选抗DN作用的极性部位，最终得到由香椿子正丁醇部位和乙酸乙酯部位组成的提取物。

本发明方法采用系统溶剂法提取不同极性部位，运用DN动物模型，按照“等剂量不等强度原则”进行评价，得到一种具有抗DN作用的香椿子提取物。该发明为进一步从香椿子中寻找治疗糖尿病肾病的活性成分或先导化合物，也为下一步综合开发利用我国香椿子天然植物资源提供资料，所以具有一定的科学意义和实用价值。

下面结合具体实施方式对本发明的技术方案进一步的说明。

具体实施方式

实施例1 不同极性部位的香椿子提取物制备

1.热回流法提取

称取干燥香椿子10 kg，适当粉碎，分别用8倍量95%、75%、55%乙醇热回流提取1次，每次2小时，过滤后合并提取液，用旋转蒸发仪浓缩至提取液无乙醇味。

2.系统溶剂法萃取

浓缩后的提取液以水混悬，依次用石油醚( 60～90 ℃)、乙酸乙酯、正丁醇萃取，各自萃取3 次，合并各萃取溶液，萃取剩余的部分为水部分。

3.香椿子不同极性部位的提取物制备

系统溶剂法萃取的4个不同极性溶液，各自减压回收溶剂至干，依次得到香椿子石油醚部位(89.4 g)、乙酸乙酯部位(72.5 g)、正丁醇部位(163.2 g)、水部位(320.6 g)。

实施例2 不同极性部位香椿子提取物对DN大鼠肾脏的保护作用

1.材料与试剂

采用实施例1制备的香椿子极性部位；SPF级Wistar雄性大鼠，体重(200±20)g；STZ，为Sigma公司产品；BT-3000全自动生化分析仪，意大利德尔曼；尿素氮、肌酐、微量白蛋白试剂盒，为南京建成生物公司产品；其它试剂均为国产分析纯。

2.实验方法