[发明专利]对虾白斑综合症病毒的鸡胚培养方法

权利要求书

1.一种对虾白斑综合症病毒的鸡胚培养方法，其特征在于：采用SPF鸡胚作为对虾白斑综合症病毒的体外培养体系，选择预先培养了6-7天的健康鸡胚，将预先制备除菌了的对虾白斑综合症病毒接种液接种至鸡胚尿囊膜上，收集培养时间为5-10天的死亡鸡胚进行匀浆离心分离，得到含对虾白斑综合症病毒的上清液。

2.根据权利要求1所述的对虾白斑综合症病毒的鸡胚培养方法，其特征在于具体的操作步骤如下：

（1）选取符合SPF规格的新鲜种蛋，气室向上38℃孵化，相对湿度50%，每4小时翻蛋一次，培养6-7天后，选取血管粗大且呈鲜红色的健康发育良好的鸡胚在暗室内画出气室边缘并标明大血管所处位置，以备病毒接种用；

（2）选取患白斑综合症的日本对虾若干只，取甲壳和内脏，按质量体积比1g：10ml的比例将甲壳和内脏加入到PH为7.4的0.1 M的PBS缓冲液，于匀浆器中匀浆，将匀浆液于4℃，6000g离心20min后，取含病毒的上清液，将离心所得的沉淀用1～2ml的0.1M的PBS重悬，再次匀浆，将再次匀浆得到的匀浆液于4℃，6000g，离心20min，合并两次离心所得的上清液，将合并所得上清液先用0.45μm的滤膜抽滤除去组织碎片，再用0.22μm的滤膜抽滤除菌，除菌后的上清液每毫升加入1000单位青霉素和1000ug链霉素后，于4℃冰浴过夜处理，即得到对虾白斑综合症病毒接种液；

（3）选取健康，发育良好的6-7日龄的鸡胚，将对虾白斑综合症病毒接种液按接种量0.15-0.2ml接种到鸡胚的尿囊膜上，将已接种了病毒的鸡胚于33℃的恒温条件下培养13-14天，收集培养时间为5-10天的死亡鸡胚；

（4）将步骤（3）得到的死亡鸡胚分离出尿囊膜与尿囊液，按质量体积比1g：10ml的比例将尿囊膜与尿囊液的混合物加入到PH为7.4的0.1 M的PBS缓冲液，重复步骤（2）即得到含对虾白斑综合症病毒的上清液。

3.根据权利要求2所述的对虾白斑综合症病毒的鸡胚培养方法，其特征在于：步骤（2）中采用的PBS缓冲液配制方法是：8g NaCl，0.2gKCl，3.62g Na₂PO₄??12H₂O，0.24g KH₂PO₄，加入800ml双蒸水完全溶解，调节PH至7.4，加入双蒸水定容至1000ml，高压灭菌。