[发明专利]一种用于生产棘白菌素B的培养基

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，特别涉及一种用于生产棘白菌素B的培养基以及采用所述培养基的棘白菌素B生产方法。

背景技术

20世纪70年代，人们由真菌(Aspergillus nidulans)的发酵液中获得第一个天然脂肽类化合物棘白菌素B(echinocandin B，以下简称ECB)，研究发现它是β-1，3-D-葡聚糖合成酶的非竞争性抑制剂，主要作用于念珠菌属(Candidas)和曲霉菌属(Aspergillus)。ECB通过抑制真菌体内的β-1，3-D-葡聚糖合成酶，使真菌不能合成葡聚糖，从而使细胞壁结构异常，致使细胞破裂，细胞内容物渗漏，导致真菌死亡。ECB对细胞色素P450无作用，不良反应少，与两性霉素B和唑类抗真菌药物无交叉耐药性，但由于具有毒性，尤其是溶血性，而未能用于临床。

以天然产物ECB为原料，通过侧链修饰获得的抗真菌药物阿尼芬净(anidulafungin)是由礼来公司和Vicuron Pharmaceuticals公司联合研制开发，已完成III期临床，处于注册前阶段，给药途径为静脉滴注。动物实验研究表明，同抗真菌药物卡泊芬净和米卡芬净相比，阿尼芬净对烟曲霉菌活性更强。在一项对食管念珠菌感染患者进行的双盲对照试验中，静脉滴注阿尼芬净的有效率与氟康唑基本一致，为97.2％，氟康唑的有效率为98.8％，而阿尼芬净的不良反应发生率低，为10％，对照组为13％，因此具有良好的市场前景。

ECB结构式如下：

棘白菌素B

美国专利4,024,246公布了利用曲霉菌(Aspergillus nidulans)NRRL 8112发酵生产ECB的过程：从斜面培养基(番茄酱2％，婴儿燕麦2％，琼脂2％，水94％，上述百分比均为重量百分比)上取ECB产生菌接种于含种子培养基(葡萄糖1％，甘油1％，棉籽粕2.5％，碳酸钙0.1％，水95.4％，上述百分比均为重量百分比)中，25℃振荡培养48小时后接种于含发酵培养基(蔗糖2％，麦芽糖1％，麦芽提取物1％，糖蜜0.5％，玉米浆0.5％，酶解酪蛋白0.5％，水94.5％，上述百分比均为重量百分比)的发酵罐中，通风条件下，25℃培养5天，经HPLC检测效价为150～200μg/ml。

美国专利4,024,245公布了利用曲霉菌(Aspergillus rugulosus)NRRL 8113发酵生产ECB的过程：从斜面培养基(糊精1％，酶解酪蛋白0.2％，酵母膏0.1％，牛肉膏0.1％，KCl 0.02％，MgSO₄·7H₂O 0.02％，FeSO₄·7H₂O 0.0004％，水98.5596％)上取ECB产生菌接种于含种子培养基(蔗糖2.5％，糖蜜3.6％，玉米浆0.6％，酶解酪蛋白1％，K₂HPO₄ 0.2％，水92.1％，上述百分比均为重量百分比)中，25℃振荡培养24小时后接种于含发酵培养基(葡萄糖2.5％，淀粉1％，蛋白胨1％，糖蜜0.5％，酶解酪蛋白0.4％，MgSO₄·7H₂O 0.7％，KCl0.2％，FeSO₄·7H₂O 0.004％，CaCO₃ 0.2％，上述百分比均为重量百分比)的发酵罐中，通风条件下，25℃培养4天，经HPLC检测效价为100～200μg/ml。

上述两个发明各公开了一种菌产生的化合物ECB及其制备方法，但是使用这两种方法生产ECB，发酵培养产物产率偏低，因此都不能满足工业化的 要求。

因此，本领域迫切需要一种使发酵产物ECB产率高的发酵培养基。

发明内容

因此，本发明要解决的技术问题就是针对目前曲霉菌(Aspergillus nidulans)发酵生产棘白菌素B产率低的不足，提供一种适合于培养曲霉菌(Aspergillus nidulans)，可显著提高棘白菌素B发酵水平的培养基。

本发明解决上述技术问题的技术方案如下：

本发明的技术方案之一是：一种用于生产棘白菌素B的培养基，所述的培养基含有碳源、有机氮源和无机盐，其中，所述的碳源包括葡萄糖、淀粉和油脂。

在本发明的一优选例中，所述的培养基包括：葡萄糖2-10％、淀粉2-6％和油脂0.1-2％。本发明中，所述的百分比为占培养基的质量百分比。