[发明专利]海绵共附生土曲霉及制备(+)-terrein的用途

说明书

技术领域

本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种绵共附生土曲霉及制备(+)-terrein的用途。

背景技术

土曲霉已被广泛应用于降脂药物洛伐他汀以及化工原料衣康酸的生产，但尚未被用于(+)-terrein的生产。(+)-terrein是一种环戊烯酮类化合物，结构如图1所示，最初即从土曲霉发酵液中分离得到，近年来，人们发现(+)-terrein的活性十分多样，不仅具有抗细菌、真菌、杂草的活性，还可以抑制肿瘤细胞血管新生素的分泌，抑制黑色素合成，抑制皮肤角质增生，抑制牙髓细胞炎症反应，促进成骨细胞与钛支架融合等。可以预见(+)-terrein将来在医疗、美容、农业等众多领域会有良好的应用前景。

化学合成制备(+)-terrein的技术往往有总产率不高，且需要采用高温高压等极端反应条件，需要昂贵的反应试剂，或是终产物不具备立体结构的选择性。而目前采用微生物发酵制备(+)-terrein的产量又十分有限，少则数百μg/L(Phattanawasin P，et al.Weed growth inhibitors from Aspergillus fischeri TISTR 3272.Natural Product Research 2007；21：1286-1291)，多则数百mg/L(M.Demasi，et al.Studies on(+)-terrein as a New Class of Proteasome Inhibitors.Journal of the Brazilian Chemical Society 2010；21：229-305)，而未能达到具备生产价值的g/L量级。

发明内容

本发明的目的在于提供一种海绵共附生土曲霉及制备(+)-terrein的用途。本发明的海绵共附生土曲霉分离自中国南海永兴岛Phakellia fusca海绵，其(+)-terrein产量相较于现有其他菌株有较大提高，可达到3.71g/L。

本发明是通过以下的技术方案实现的：

本发明的海绵共附生土曲霉菌株为土曲霉(Aspergillus terreus)PF26已经于2011年8月31日递交中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为CGMCC NO.5208。

该微生物经分子生物学18S及ITS rDNA基因序列分析，结合形态学观察，确定其分类学地位属于曲霉属(Aspergillus)的土曲霉(Aspergillus terreus)，菌株编号为PF26。

所述的18S rDNA基因序列已提交GenBank，序列号为JN831364，最相似序列为土曲霉序列GU227345，最大相似度为99％，以18S rDNA基因序列同源性为基础构建形成包括菌株PF26在内的相关真菌系统发育树如图2所示。

所述的ITS rDNA基因序列已提交GenBank，序列号为JN831365，最相似序列为土曲霉序列JN194186，最大相似度为100％，以ITS rDNA基因序列同源性为基础构建形成包括菌株PF26在内的相关真菌系统发育树如图3所示。

18S rDNA基因与ITS rDNA基因的鉴定结果吻合，最相似序列均为土曲霉序列，且在两个系统发育树上PF26的序列也均与土曲霉序列聚类在一起，因此通过分子生物学的鉴定可以说明PF26是一株土曲霉。

本发明还涉及上述的海绵共附生土曲霉菌株在制备化合物(+)-terrein中的用途。

优选的，所述制备包括将海绵共附生土曲霉菌株进行发酵的步骤。

优选的，所述发酵具体为：将发酵培养基于115℃灭菌30min；将土曲霉PF26的孢子接入灭菌后的所述发酵培养基中，接种量为4×10⁶个孢子/mL，于28℃，180rpm的摇床培养24天。

优选的，所述发酵培养基的配置方法包括如下步骤：取葡萄糖28.41g、麦芽糖23.18g、甘露醇20.00g、麦芽提取物8.52g、谷氨酸钠10.00g、氯化铵10.00g，之后溶于1L人工海水中，即得所述发酵培养基。

优选的，所述人工海水的配置方法包括如下步骤：将26.518g氯化钠、2.447g氯化镁、3.305g硫酸镁、1.141g氯化钙、0.725g氯化钾、0.202g碳酸氢钠以及0.083g溴化钠溶解于1L蒸馏水中，即得，所述配制好的人工海水的pH值为7.0～7.2。