[发明专利]检测单链和/或双链DNA的分子探针及其应用有效
申请号: | 201210006970.3 | 申请日: | 2012-01-11 |
公开(公告)号: | CN102590494A | 公开(公告)日: | 2012-07-18 |
发明(设计)人: | 田丹碧;刘会祥;唐雪梅;马玉洁;梅亚军;宋荣斌 | 申请(专利权)人: | 南京工业大学 |
主分类号: | G01N33/542 | 分类号: | G01N33/542;G01N21/64 |
代理公司: | 江苏致邦律师事务所 32230 | 代理人: | 樊文红 |
地址: | 210009 江苏省南京*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 检测 dna 分子 探针 及其 应用 | ||
1.一种化学结构式I的分子探针,其特征在于其通过合成路线II所述的方法制备而得:
1)化合物1的合成:将邻菲啰啉与溴化钾干燥后加入到充分冷却的浓硫酸中,充分冷却后再滴加HNO3;将反应体系加热到40~50℃恒温2小时,再升温到80~90℃恒温2小时,再到120℃恒温1小时,然后降温到80℃恒温一夜;冷却到室温后,中和反应体系至pH=6~7,减压抽滤后用CH2Cl2萃取至CH2Cl2接近无色得到化合物1粗产品;
2)化合物2的合成:用乙醇溶解化合物1,然后滴加邻苯二胺的乙醇溶液;回流两小时得到淡黄色絮状沉淀,减压抽滤,重结晶后真空干燥得到海绵状黄色固体即化合物2;
3)化合物3的合成:将N,N’-二甲基甲酰胺加入三氯化钌和2,2’-联吡啶的混合体系,加热回流4个小时后,蒸发掉将所得溶液的大部分溶剂,剩下的溶液冷却至室温后,再加入丙酮并保持温度0℃静置24 个小时,析出棕黑色的固体不溶物即化合物3粗产品;
4)化学结构式I的分子探针的合成:将化合物3与化合物2按照摩尔比为1∶1.1的比例加入乙醇中,在氮气保护下加热回流直到反应溶液变为红色透明溶液为止,冷却到室温;蒸出大部分溶剂后加入水煮沸后,再放到冰水浴中冷却,析出不溶物;经过滤,洗涤,旋蒸,重结晶,得到化学结构式I的探针分子;
I;
II。
2.根据权利要求1所述的化学结构式I的分子探针,其特征在于所述的步骤1)的粗产品在甲醇中重结晶,得到黄色固体纯品。
3.根据权利要求1所述的化学结构式I的分子探针,其特征在于所述的步骤1)对产物pH的调节中和时先用浓NaOH溶液,后用Na2CO3溶液直至无气泡产生。
4.根据权利要求1所述的化学结构式I的分子探针,其特征在于所述的步骤3)将化合物3粗产品减压抽滤并用蒸馏水洗涤粗产品两次;再将所得粗产品放在水与乙醇为体积比1:1的混合溶液中加热回流一个小时后过滤,再加入氯化锂充分搅拌;最后蒸发溶液中的乙醇,剩下的水溶液冷却后再继续放在冰浴中冷却;静置24个小时后,溶液中析出黑色晶体;过滤,真空干燥得到化合物3纯品。
5.权利要求1所述的化学结构式I的分子探针的制备方法,其特征在于其通过合成路线II所述的方法制备而得:
1)化合物1的合成:将邻菲啰啉与溴化钾干燥后加入到充分冷却的浓硫酸中,充分冷却后再滴加HNO3;将反应体系加热到40~50℃恒温2小时,再升温到80~90℃恒温2小时,再到120℃恒温1小时,然后降温到80℃恒温一夜;冷却到室温后,中和反应体系至pH=6~7,减压抽滤后用CH2Cl2萃取至CH2Cl2接近无色得到化合物1粗产品;
2)化合物2的合成:用乙醇溶解化合物1,然后滴加邻苯二胺的乙醇溶液;回流两小时得到淡黄色絮状沉淀,减压抽滤,重结晶后真空干燥得到海绵状黄色固体即化合物2;
3)化合物3的合成:将N,N’-二甲基甲酰胺加入三氯化钌和2,2’-联吡啶的混合体系,加热回流4个小时后,蒸发掉将所得溶液的大部分溶剂,剩下的溶液冷却至室温后,再加入丙酮并保持温度0℃静置24 个小时,析出棕黑色的固体不溶物即化合物3粗产品;
4)化学结构式I的分子探针的合成:将化合物3与化合物2按照摩尔比为1∶1.1的比例加入乙醇中,在氮气保护下加热回流直到反应溶液变为红色透明溶液为止,冷却到室温;蒸出大部分溶剂后加入水煮沸后,再放到冰水浴中冷却,析出不溶物;经过滤,洗涤,旋蒸,重结晶,得到化学结构式I的探针分子;
I;
II。
6.根据权利要求5所述的化学结构式I的分子探针的制备方法,其特征在于所述的步骤1)的粗产品在甲醇中重结晶,得到黄色固体纯品。
7.根据权利要求1所述的化学结构式I的分子探针的制备方法,其特征在于所述的步骤1)对产物pH的调节中和时先用浓NaOH溶液,后用Na2CO3溶液直至无气泡产生。
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