[发明专利]一种检测藻类溶血毒素活性的方法与应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测方法，特别涉及一种检测藻类溶血毒素活性的方法与应用。

背景技术

近年来，随着沿海经济的高速增长和对外贸易的加强，港口的建设和远洋运输能力不断增强，沿海水域富营养化急剧增加。有毒、有害赤潮呈不断上升的趋势，造成沿海水产养殖的重大经济损失。有毒、有害赤潮的研究亦成为国际赤潮与海洋环境研究领域重要的议题和内容。现场观察发现，1997年10月间发生在广东饶平柘林湾的球形棕囊藻(Phaeocystis globosa)赤潮使该湾养殖的鱼类全部死亡，损失达六千万人民币；2005年5月间发生在湛江港养殖区的同种赤潮，仅引起少数鱼类死亡，在渤海湾发生的同种赤潮对鱼类也没有毒性。上述现象均说明环境因子可能影响着藻类毒素的生成。

鱼毒性赤潮藻溶血毒素毒性很强，传统的检测方法很难快速检测该藻是否具鱼毒性，且测定结果在时间上明显滞后。当毒性实验完成时，赤潮灾害或许已经发生，虽然在某种程度上这些方法可以避免人类中毒，在保障海产品食用安全方面发挥一定作用，但不能化解和减少因赤潮毒素对养殖业带来的巨大经济损失。只有从毒素源头上入手，及时、准确的预报产毒生物的消长情况，才有可能从根本上克服赤潮毒素对人类的威胁、减少因之带来的经济损失。赤潮毒素主要来源于赤潮藻，因此迫切需要建立快速、准确的产毒藻株鉴别技术，以实现赤潮的应急监测。

三维荧光光谱法是近二十年发展起来并趋于成熟的荧光分析技术。该方法具有检测速度快、简单易携、高灵敏度的特点。目前被广泛应用于油种鉴别、水体检测以及中药鉴别等分析领域。目前国内外尚未有人利用三维荧光分析技术来检测鱼毒性赤潮藻溶血毒素活性的大小。

发明内容

本发明的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种检测藻类溶血毒素活性的方法。

本发明的另一目的在于提供所述检测藻类溶血毒素活性的方法的应用。

本发明的目的通过下述技术方案实现：一种检测藻类溶血毒素活性的方法，包含以下步骤：

(1)通过荧光分光光度计测定藻细胞样品的三维荧光，激发波长为400～600nm，发射波长为650～750nm，得到藻细胞样品的三维荧光数据；

(2)将藻细胞样品的三维荧光数据转换成TXT文件格式，根据Delaunay三角形方法，消除藻类三维荧光光谱的瑞利散射；再将三维荧光光谱最大归一化，然后对其三维荧光光谱进行Coif2小波分析，选取荧光特征谱；

(3)在波长λEm＝650～700nm，波长λEm＝725～750nm，波长λEx＝400～425nm出现与藻类的溶血活性强弱一致的荧光强度变化，初步判断所检测的藻细胞样品为鱼毒性赤潮藻；若在波长λEm＝650～700nm，波长λEm＝725～750nm，波长λEx＝400～425nm没有出现荧光光谱强度变化，初步判断所检测的藻细胞样品为非鱼毒性赤潮藻；

(4)将步骤(2)得到的荧光特征谱进行Fisher判别，Fisher判别函数方程为：

y₁＝-1.706-105.508x₁+6.273x₂+93.118x₃-4.311x₄+16.307x₅-9.476x₆-0.173x₇+3.866x₈+10.436x₉-6.751x₁₀-6.511x₁₁+94.690x₁₂-104.538x₁₃；

y₂＝0.963-112.478x₁-51.634x₂+62.196x₃+76.226x₄+15.826x₅-8.457x₆+4.273x₇+8.653x₈+5.382x₉+0.038x₁₀+45.365x₁₁-4.937x₁₂-33.386x₁₃；

其中x为自变量值，即步骤(2)测得的特征荧光谱的荧光强度；y为测得的溶血活性数值；