[发明专利]一种检测藻类溶血毒素活性的方法与应用

权利要求书

1.一种检测藻类溶血毒素活性的方法，其特征在于包含以下步骤：

(1)通过荧光分光光度计测定藻细胞样品的三维荧光，激发波长为400～600nm，发射波长为650～750nm，得到藻细胞样品的三维荧光数据；

(2)将藻细胞样品的三维荧光数据转换成TXT文件格式，根据Delaunay三角形方法，消除藻类三维荧光光谱的瑞利散射；再将三维荧光光谱最大归一化，然后对其三维荧光光谱进行Coif2小波分析，选取荧光特征谱；

(3)在波长λEm＝650～700nm，波长λEm＝725～750nm，波长λEx＝400～425nm出现与藻类的溶血活性强弱一致的荧光光谱强度变化，初步判断所检测的藻细胞样品为鱼毒性赤潮藻；若在波长λEm＝650～700nm，波长λEm＝725～750nm，波长λEx＝400～425nm没有出现荧光光谱强度变化，初步判断所检测的藻细胞样品为非鱼毒性赤潮藻；

(4)将步骤(2)得到的荧光特征谱进行Fisher判别，Fisher判别函数方程为：

y₁＝-1.706-105.508x₁+6.273x₂+93.118x₃-4.311x₄+16.307x₅-9.476x₆-0.173x₇+3.866x₈+10.436x₉-6.751x₁₀-6.511x₁₁+94.690x₁₂-104.538x₁₃；

y₂＝0.963-112.478x₁-51.634x₂+62.196x₃+76.226x₄+15.826x₅-8.457x₆+4.273x₇+8.653x₈+5.382x₉+0.038x₁₀+45.365x₁₁-4.937x₁₂-33.386x₁₃；

其中x为自变量值，即步骤(2)测得的特征荧光谱的荧光强度；y为测得的溶血活性数值；

当检测样品时，分别计算y₁和y₂值，取大者为其y，根据以下标准判定藻细胞样品毒性的大小：y＝10～20HU为中毒性；y＜10HU为弱毒性；y＞20HU为强毒性。

2.根据权利要求1所述的检测藻类溶血毒素活性的方法，其特征在于：步骤(1)中所述的发射波长为650～680nm或725～750nm。

3.根据权利要求1所述的检测藻类溶血毒素活性的方法，其特征在于：步骤(2)所述的三维荧光数据首先通过Matlab6.5软件消除瑞利散射、最大归一化以及Coif2小波分析，再通过SPSS13.0进行Fisher判别，最后通过Origin8.0制图，得到荧光特征谱。

4.根据权利要求1所述的检测藻类溶血毒素活性的方法，其特征在于：步骤(4)所述的Fisher判别通过SPSS13.0进行。

5.权利要求1～4任一项所述的检测藻类溶血毒素活性的方法在赤潮水体鱼毒性的检测中应用。

6.根据权利要求5所述的检测藻类溶血毒素活性的方法在赤潮水体鱼毒性的检测中应用，其特征在于：所述的藻类为鱼毒性赤潮藻。

7.根据权利要求6所述的检测藻类溶血毒素活性的方法在赤潮水体鱼毒性的检测中应用，其特征在于：所述的鱼毒性赤潮藻为海洋卡盾藻、卵圆卡盾藻或米氏凯伦藻中的至少一种。