[发明专利]在制备抗毒素、抗血清中灭活病毒的方法

权利要求书

1.一种在制备抗毒素、抗血清中灭活病毒的方法，其特征在于包括下列步骤：

A、将血浆原料稀释２～４倍体积后，调节稀释液pH值至2.8～4.0；

B、在每100ml步骤A的稀释液中，加入0.1～1.0g胃酶，于29～31℃下消化１～3小时，或者于20～22℃下消化20～22小时，得消化液；

C、在每100ml步骤B的消化液中，加入14～16ｇ硫酸铵，并调节混合液pH值至4.8～5.6，加热混合液至57～59℃，并保持30分钟，降温至45℃以下，分离，得上清液；

D、将步骤C的上清液稀释至所含蛋白浓度为10～50 g/L，在该稀释液中加入有机溶剂和去污剂，直至每100ml稀释液中含有0.25～1.35g的有机溶剂，每100ml稀释液中含有1.00～1.35g的去污剂，于24～37℃水浴中恒温4～6小时，得混合液；

E、在每100ml步骤D的混合液中，加入15～25 g硫酸铵，静置90～180分钟，分离去上清液，得沉淀物；

F、将步骤E的沉淀物稀释至蛋白含量低于20 g/L，调整稀释液pH值为7.7～7.9，并按每100ml稀释液加入0.6～1.0g明矾的量，在稀释液中加入明矾，静置60～120分钟后，过滤得上清液；

G、将步骤F的上清液用3～5万分子量的滤膜，浓缩至五分之一体积时，在浓缩液中加入20mM、pH值为6.0～8.0、加入量是步骤A的原料血浆体积的2～5倍的PB进行置换、浓缩，直至硫酸铵含量低于1.0 g/L，得浓缩液；

H、将步骤F的浓缩液，经离子交换层析后，得收集液，按常规对收集液进行除菌、过滤后，分装得灭活病毒的抗毒素、抗血清制品。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤A、D、F的稀释是采用注射用水或质量浓度为0.8～1.0%的NaCl溶液进行稀释的。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤A的稀释液pH值、步骤C的混合液pH值，是用1～4N的盐酸溶液调整的。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤F的稀释液pH值是用1～4N的氢氧化钠溶液调整的。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤D的有机溶剂为医用级的磷酸三丁酯；去污剂为医用级的聚山梨酯-80或Triton X-100中的一种，其中：聚山梨酯-80终浓度为每100ml稀释液中含有1.00～1.35g的聚山梨酯-80，Triton X-100终浓度为每100ml稀释液中含有1.00～1.35g的Triton X-100。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤H的离子交换层析的介质为Q Sepharose Fast Flow 、DEAE Sepharose Fast Flow中的一种阴离子交换剂。