[发明专利]一种快速制备色谱分离制备丹酚酸B的方法

权利要求书

1.一种快速制备色谱分离制备丹酚酸B的方法，其特征在于：丹参药材先用含乙醇的水溶液提取，经有机溶剂萃取得到浸膏，以浸膏为原料，以快速制备色谱为分离手段，以甲醇-水为洗脱体系，最终制得丹酚酸B；具体步骤为：

(1)药材处理：丹参药材以1∶10～20的料液比(m/v)，用体积分数30％～80％的乙醇-水溶液，超声提取0.5～2h，过滤，滤液60℃以下减压浓缩至为原体积的1/2～1/4，过滤，滤液用乙醚萃取，乙醚用量与浓缩液体积比为0.5～1；水层加酸调节pH为3～4，过滤获得水层清液，水层清液以乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯层减压浓缩至干，得到乙酸乙酯浸膏；

(2)样品处理：乙酸乙酯浸膏加体积分数10％～70％的甲醇-水溶解，得浓度为30～60mg·mL^-1的样品溶液，离心，取上清液，得到样品溶液；

(3)色谱柱预处理：快速制备色谱选择制备型中低压液相色谱柱，以洗脱体系溶液平衡色谱柱；洗脱体系溶液为甲醇-水溶液，其中甲醇在甲醇-水溶液中的体积分数为25％～50％；

(4)进样：将步骤(2)获得的样品溶液进样，进样体积为1～5mL；

(5)洗脱：采用洗脱体系溶液洗脱，流速控制在3～5mL·min^-1，收集洗脱液；洗脱体系溶液为甲醇-水溶液，其中甲醇在甲醇-水溶液中的体积分数为25％～50％；

(6)丹酚酸B的获取：收集的洗脱液经饱和后，用乙酸乙酯萃取，经浓缩和干燥得到丹酚酸B。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(1)所述的提取温度小于60℃。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(1)所述超声提取0.5～2h后，过滤的残渣按料液比1∶10～20的比例加入体积分数30％～80％乙醇再次提取0.5～2h，合并两次的提取液，滤过，合并滤液，浓缩；过滤，滤液以乙醚萃取，弃去，水层调pH为3～4后，过滤，滤液再以乙酸乙酯萃取；步骤(1)调节水层为酸性采用盐酸溶液，浓度为0.1～1mol·L^-1。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(1)所述的乙醚萃取次数为1～3次，每次乙醚的用量与浓缩液的体积比为1∶0.5～1。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(1)所述的乙酸乙酯萃取次数为1～3次，每次乙酸乙酯的用量与水层清液体积比为1∶0.5～1。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(3)是以5～10倍柱体积的洗脱体系溶液平衡色谱柱。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(3)所述制备型中低压色谱柱选用商品化或自己填充的中低压色谱柱，填料为C18键合相填料；色谱柱填料平均粒径为30～60μm。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(6)收集的洗脱液加入氯化钠固体至饱和，用乙酸乙酯提取，合并乙酸乙酯层，经减压浓缩和真空干燥得丹酚酸B，减压浓缩和真空干燥的温度为30℃～60℃。

9.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(5)所述的洗脱过程采用在线紫外检测，自动收集洗脱液，紫外检测波长为254nm和286nm。