[发明专利]类鲨鱼硫酸软骨素及其制备方法

说明书

本发明涉及类鲨鱼硫酸软骨素及其制备方法。具体而言，本发明涉及类鲨鱼硫酸软骨素，其显示非常低量的4-硫酸酯、高电荷密度和可与天然硫酸软骨素相比的生物活性；本发明还涉及制备所述类鲨鱼硫酸软骨素的方法。

硫酸软骨素(下文称为CS)，属于称为糖胺聚糖(GAGs)的天然复合多糖类，由通过β(1->3)连接的D-葡糖醛酸(GlcA)和N-乙酰基-D-半乳糖胺(GalNAc)的不同硫酸酯化的残基的交替二糖序列组成。

取决于二糖性质，已知具有不同碳水化合物主链的CS。事实上，即使天然的和合成的已知CS均主要由多种百分比的两种类型的二糖单元(即在GalNAc的4位或6位硫酸酯化)组成，但具有不同的硫酸酯基团的数量和位置的二糖可以以多种百分比例位于多糖链内。例如，在CS主链中存在通常为低量的未硫酸酯化的二糖，而具有在不同位置(诸如GlcA的2位和GalNAc的6位(二糖D)或GalNAc的4位和6位(二糖E))的O-连接的两个硫酸酯基团的二硫酸酯化的二糖可以以多种与特定动物来源有关的比例存在于CS主链中[Volpi N.,J Pharm Pharmacol61,1271,2009.Volpi N.,J Pharm Sci96,3168,2007]。

CS显示具有以下结构式的二糖重复单元:

其中R₂、R₄和R₆独立地是H或SO3^-。

以下报道最多出现的一些简称的含义，所述简称目前用于简要地分辨组成CS的交替的二糖序列的不同硫酸酯化的残基。

Di-0S    (R₂=H；R₄=H；R₆=H)

Di-6S(C)   (R₂=H；R₄=H；R₆=SO3^-)

Di-4S(A)   (R₂=H；R₄=SO3^-；R₆=H)

Di-4,6diS(E) (R₂=H；R₄=SO3^-；R₆=SO3^-)

Di-2,6diS(D) (R₂=SO3^-；R4=H；R₆=SO3^-)

Di-2,4diS(B) (R₂=SO3^-；R4=SO3^-；R₆=H)

Di-2,4,6triS   (R₂=SO3^-；R4=SO3^-；R6=SO3^-)

可通过能得出CS结构特征和参数(例如特定的硫酸酯基团、电荷密度、分子量和纯度)以及生物活性的灵敏的、特异的、验证过的和公开的分析方法表征和区分天然的和合成的CS样品。

天然提取的CS样品可以表征结构和特性[Volpi N.,J Pharm Pharmacol61,1271,2009；Volpi N.,J Pharm Sci96,3168,2007；Mucci A.等,Carbohydr Polymers41,37,2000；Volpi N.,Analyt Biochem277,19,2000]。

关于CS的三-和四-硫酸酯化形式(分别为“triS”和“tetraS”)，可以注意到的是，经常在天然提取的CS样品中检测到它们，然而它们通常表征合成的CS；将二-2,4,6triS作为标准品以评价合成的CS产品中的triS CS的存在，因为天然来源的产品中不存在其他理论上可能的triS形式。

以下表1阐述从多种器官和组织、主要是软骨中提取和纯化的天然CS样品中鉴别的主要的二糖。

表1

Mn=数均分子量；Mw=重均分子量；多分散性指数=Mw/Mn；电荷密度是每个二糖单元的硫酸酯基团的数量)；ND=未检测出

表1阐述从若干来源纯化的主要的天然CS样品的特征的主要结构参数。

特别地，对于陆生的CS样品(牛、猪和鸡样品)而言，分子量参数相当相似，但是与鱼类样品(鲨鱼、鳐鱼和乌贼样品)相当不同，所述鱼类样品的分子量值大于前者所述陆生的CS样品的。