[发明专利]脂质化多肽的制造方法有效
申请号: | 201180054790.6 | 申请日: | 2011-11-15 |
公开(公告)号: | CN103403175A | 公开(公告)日: | 2013-11-20 |
发明(设计)人: | 冷治湘;曾琪玲;刘士任;陈信伟;庄再成 | 申请(专利权)人: | 财团法人卫生研究院 |
主分类号: | C12P21/02 | 分类号: | C12P21/02;C12N15/00;C12N15/31;C12N15/70 |
代理公司: | 北京中博世达专利商标代理有限公司 11274 | 代理人: | 申健 |
地址: | 中国台湾苗栗县*** | 国省代码: | 中国台湾;71 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 脂质化 多肽 制造 方法 | ||
1.一种于大肠杆菌制造重组脂质化多肽的方法,该方法包含:
提供一种经适应表现重组脂质化多肽的大肠杆菌宿主细胞;及
将该大肠杆菌宿主细胞在能表现呈脂质化形式的多肽的条件下培养于基本培养基中,其中经此表现的重组脂质化多肽的未成熟对成熟脂蛋白的比例(I/M比例)为3.9或以下。
2.如权利要求1所述的方法,其中该基本培养基为M9培养基。
3.如权利要求1所述的方法,其中该基本培养基缺少有机氮源。
4.如权利要求1所述的方法,其中该基本培养基含有70mM或以下的磷酸盐。
5.如权利要求1所述的方法,其中该基本培养基缺少铁源。
6.如权利要求1所述的方法,其中该基本培养基包括葡萄糖。
7.如权利要求1所述的方法,其中该基本培养基的pH值介于7.0至8.5。
8.如权利要求2所述的方法,其中该M9培养基缺少有机氮源与铁源且含有70mM或以下的磷酸盐。
9.如权利要求2所述的方法,其中该M9培养基包括葡萄糖。
10.如权利要求2所述的方法,其中该M9培养基的pH值介于7.0至8.5。
11.如权利要求1所述的方法,其中该I/M比例为0.1或以下。
12.如权利要求1所述的方法,其中该I/M比例为0.01或以下。
13.如权利要求1所述的方法,其中该I/M比例为0.001或以下。
14.如权利要求1所述的方法,其中该大肠杆菌宿主细胞具有一表现载体,其包括编码一种含有细菌脂蛋白质讯号肽的重组多肽的核酸序列。
15.如权利要求14项所述的方法,其中该脂蛋白质讯号肽包括Ag473的D1序列。
16.如权利要求14所述的方法,其中该脂蛋白质讯号肽包含吖啶黄素-抗性蛋白E前驱物的P3序列。
17.如权利要求14所述的方法,其中该核酸序列经由操作连接至一种可诱导性启动子。
18.如权利要求17所述的方法,其中该启动子可被异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导。
19.如权利要求1所述的方法,其中该重组多肽包括一病原菌的抗原。
20.如权利要求1所述的方法,其中该大肠杆菌宿主细胞为C43(DE3)。
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