[发明专利]一种使用N-硫代化合物用于寡核苷酸合成的新方法

权利要求书

1.一种用于合成寡核苷酸的方法，该方法包括使用具有通式(I)的硫化剂：

其中

R是选自由通过环形碳原子而结合到S原子上的芳基基团和杂芳基基团组成的组；

R₁和R₂独立地是有机残基，优选是C1．C20烃残基，任选是不饱和的或芳香族的；

用于硫化所述寡核苷酸的前体的至少一个磷核苷酸间连键。

2.根据权利要求1所述的方法，其中R是卤苯基或烷基苯基，优选是4．卤苯基，尤其优选是4．氯苯基。

3.根据权利要求1和2中任一项所述的方法，其中R₁和R₂选自低级烷基或环烷基(C1．C7)、苯基包括取代的苯基、和萘基基团，更优选是甲基基团。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中将该硫化剂溶解在有机溶剂中，该有机溶剂优选是卤代烃溶剂。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中硫化剂与待硫化的磷核苷酸间连键的摩尔比是从1.0到2.0。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述寡核苷酸的前体包含选自以下项的核苷：核糖核苷类、2’．脱氧核糖核苷类、2’．取代的核糖核苷类、2’-4’-锁-核糖核苷类、3’-氨基-核糖核苷类、3’-氨基-2’-脱氧核糖核苷类。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中该磷核苷酸间连键是H-膦酸酯二酯键。

8.根据权利要求7所述的方法，其中该偶联是在溶液相中进行的。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，该方法进一步包括将根据权利要求1至8中任一项获得的寡核苷酸进行纯化的步骤。

10.根据权利要求9所述的方法，该方法包括至少沉淀该寡核苷酸。

11.根据权利要求9或10所述的方法，进一步包括用溶剂提取该寡核苷酸。

12.根据权利要求10或11所述的方法，该方法包括将该寡核苷酸溶解在极性有机溶剂中，该极性有机溶剂优选选自二氯甲烷、氯仿、乙腈、丙酮和吡啶。

13.根据权利要求12所述的方法，其中使用范围从约0.5(n+1)mL到约2.0(n+1)mL、优选是约1.0(n+1)mL的溶剂体积，其中n是硫代磷酸酯三酯连键的毫摩尔数。

14.根据权利要求12或13所述的方法，其中用非极性有机溶剂处理该寡核苷酸的溶液直到该溶液变浑浊，该非极性有机溶剂优选选自：烃类、醚溶剂以及它们的混合物。

15.根据权利要求14所述的方法，其中使用范围从约1(n+1)mL到约4(n+1)mL、优选是约2.0(n+1)mL的溶剂体积，其中n是硫代磷酸酯三酯连键的毫摩尔数。

16.根据权利要求14或15所述的方法，其中用沉淀助剂来处理该浑浊溶液。

17.根据权利要求16所述的方法，其中该沉淀助剂选自惰性的多孔固体，这些多孔固体优选选自硅藻土、炭、木质纤维素、以及色谱固定相，例如硅胶或氧化铝。

18.根据权利要求16或17所述的方法，其中该沉淀助剂使用的量值的范围是从约0.25(n+1)g到约1.5(n+1)g、优选是约0.75(n+1)g，其中n是硫代磷酸酯三酯连键的毫摩尔数。

19.根据权利要求16所述的方法，其中在添加该沉淀助剂后，用第二级分的非极性有机溶剂处理该混合物，其中一般来说所述级分的体积范围从约1(n+1)mL到约4(n+1)mL，优选是约2.0(n+1)mL，其中n是硫代磷酸酯三酯连键的毫摩尔数。

20.根据权利要求16到19中任一项所述的方法，其中将在该沉淀步骤中获得的这些固体材料过滤出来并且洗涤。

21.根据权利要求10到20中任一项所述的方法，其中用溶剂从该含寡核苷酸的沉淀中提取该寡核苷酸。