[发明专利]用于扩增和稳定天然调节性T细胞的方法和组合物

说明书

相关申请的交叉引用

本申请要求2010年4月22日提交的61/326,907的优先权的权益，在此以引用方式将其全部并入本文以达到所有目的。

有关联邦资助研究的声明

不适用。

发明背景

调节性T细胞(也称为“抑制性T细胞”或“Treg”)是起抑制免疫系统的激活的作用并且从而维持免疫系统稳态和对自身抗原的耐受性的T细胞的特殊群体。调节性T细胞可以是天然存在的(本文中也称为“nTreg”)或它们可以在外周淋巴组织中诱导产生(本文中也称为“iTreg”)。

天然产生、源自胸腺的调节性T细胞通过维持免疫稳态和自身耐受性在控制自身免疫疾病中发挥关键作用。已经证明nTreg的过继转移可防止许多自身免疫疾病，包括实验性自身免疫脑脊髓炎、结肠炎、糖尿病和胃炎。然而，一旦疾病确立，转移的nTreg的作用可预测性更小。例如，在狼疮中，如果转移发生在疾病确立之后，转移的nTreg的作用是适度的。类似地，在胶原诱导的关节炎中，已经证明nTreg转移可以防止但不能缓和已经确立的疾病。一旦疾病确立nTreg的作用就缺乏的一个可能原因可能是FOXP3在炎症环境中的不稳定性、nTreg向促炎症效应细胞转化或效应性T细胞对nTreg获得抗性。

对于治疗应用，用于扩增在扩增之后对效应细胞转化保持抗性的具有稳定的表现型的nTreg的方法和组合物将是有益的。

发明概述

因此，本发明提供用于扩增具有稳定的表现型的天然调节性T细胞(nTreg)的方法和组合物。

在一个方面，本发明提供稳定nTreg以抵抗促炎症转化的方法。在一个示例性方面，该方法包括用包含维生素A衍生物的调节性组合物处理包含nTreg的细胞培养物。

在又一个方面，本发明提供通过用包含全反式维甲酸(atRA)的调节性组合物处理nTreg来稳定nTreg的表现型的方法。

在又一个方面，本发明提供用于降低与nTreg中的炎症响应相关的转录因子的表达的方法。在一个示例性方面，该方法包括用包含atRA的组合物处理nTreg。

在又一个方面，本发明提供通过对患者施用处理的nTreg来治疗患者的异常免疫反应或自身免疫疾病的方法。在一个示例性方面，所述处理的nTreg通过用包含atRA的调节性组合物处理nTreg的细胞培养物来产生。

附图简述

图1示出向nTreg中添加atRA对转化成Th17细胞的影响的数据。图1A和图1B示出由用有或没有atRA的抗CD3和抗CD28和IL-6刺激的CD4+CD25+细胞引起的IL-17细胞的百分数。图1C示出用有或没有atRA的抗CD3和抗CD28和IL-6刺激的CD4+CD25+细胞的培养物中的可溶性IL-17A。图1D示出由在有或没有IL-6的atRA或DMSO存在下用抗CD3/CD28活化的nTreg处理引起的表达FOXP3的细胞的百分数。图1E示出通过抑制氚化胸腺嘧啶吸收测定的在IL-6和/或atRA存在下的nTreg的抑制活性。

图2示出atRA对nTreg中的FOXP3表达的影响的数据。图2A示出有和没有atRA的新鲜和扩增的nTreg中的FOXP3细胞的百分数。图2B示出有和没有atRA的新鲜和扩增的nTreg中的FOXP3细胞的总数。图2C示出有或没有atRA处理的nTreg的抑制活性。图2D示出用DMSO或atRA预处理的nTreg中的IL-17表达。图2E示出用atRA或DMSO处理的nTreg中的FOXP3表达的百分数。图2F示出存在或不存在IL-6的atRA或DMSO处理的nTreg的抑制活性。

图3示出显示用atRA处理的nTreg抑制确立的胶原诱导的关节炎发展的数据。图3A示出用DMSO或atRA处理的nTreg处理之后的小鼠胶原诱导的关节炎严重程度的临床评分。图3B示出用DMSO或atRA处理的nTreg处理之后第45天的血清中的IgG1和IgG2a水平。

图4示出atRA处理对nTreg表现型和功能的影响的数据。图4A示出用或不用atRA处理的nTreg中的CD126表达的数据。图4B示出在用DMSO或atRA处理的nTreg中通过流式细胞术测定的CD126、CD130、STAT-3和ROR-γt表达的百分数。

图5示出atRA处理对人nTreg中的FOXP3表达的影响的数据。图5A示出FOXP3细胞的百分数并且图5B示出用DMSO和atRA处理的FOXP3细胞的总数。