[发明专利]动物细胞“友好”基因座的筛选载体和筛选方法

权利要求书

1.一种动物细胞“友好”基因座的筛选载体，其特征在于：所述载体由骨架部分和关键功能部分组成，所述骨架部分包括M13的DNA复制子Ori、在大肠杆菌中的筛选标记基因Amp、在真核细胞中的筛选标记基因Noe以及人的巨大病毒早期蛋白基因的启动子CMV，所述关键功能部分包括引导肽、标记基因GFP、连续的三个蛋白酶识别位点、His-tag以及LoxP和Lox2272序列，所述关键功能部分的的基因序列如SEQ ID NO：1。

2.一种动物细胞“友好”基因座的筛选方法，其特征在于：包括以下步骤：

(1)通过细胞复苏、接种细胞以及细胞转接完成对细胞的培养；

(2)通过细胞转染法使权利要求1所述的载体转染培养好的细胞；

(3)对被转染的细胞添加筛选药物G418并逐步提高筛选药物G418的含量，筛选出高抗性的细胞；

(4)测定筛选出的高抗性细胞的GFP基因表达水平，筛选出高效表达GFP基因的细胞；

(5)将权利要求1所述载体中的GFP基因替换为RFP基因，从而构建成基因交换载体；

(6)将所述基因交换载体和含有CRE基因的载体转染所述高效表达GFP基因的细胞，筛选出表型由绿色变成红色的细胞，即基因交换成功的细胞；

(7)测定所述基因交换成功的细胞的RFP基因表达水平。