[发明专利]人血管内皮生长因子抗原表位及其表位疫苗

权利要求书

1.一种人血管内皮生长因子的抗原表位，其特征在于：包含SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列。

2.一种人血管内皮生长因子的抗原表位，其特征在于：其氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示。

3.一种包含有人血管内皮生长因子抗原表位的蛋白，其特征在于，所述蛋白利用单域抗体为分子骨架，并将权利要求1或2所述的人血管内皮生长因子的抗原表位展示于所述单域抗体的CDR3区。

4.根据权利要求3所述的蛋白，其特征在于，所述蛋白利用单域抗体为分子骨架，并用权利要求1或2所述的人血管内皮生长因子的抗原表位替换所述单域抗体的CDR3区。

5.根据权利要求3所述的蛋白，其中所述单域抗体的FR2区的第9、10和12位的氨基酸分别被替换为谷氨酸、精氨酸和甘氨酸。

6.根据权利要求3或4或5所述的蛋白，其特征在于：所述单域抗体构建自人抗体、骆驼重链抗体或鼠抗体。

7.根据权利要求6所述的蛋白，其特征在于：所述蛋白的氨基酸序列包含SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：7或SEQ ID NO：10所示的序列。

8.一种制备权利要求3-7任一所述的蛋白的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)确定一种重链抗体的重链可变区的完整的氨基酸序列，以此序列作为单域抗体的氨基酸序列，并分析出其CDR3区的序列；

或

(1′)确定含轻链和重链的常规抗体的重链可变区的完整氨基酸序列，此序列即为单域抗体的基础氨基酸序列，分析出其框架区2(FR2)和CDR3区的序列，并将FR2区的第9、10和12位的氨基酸分别替换为谷氨酸、精氨酸和甘氨酸；

(2)用权利要求1或2所述的人血管内皮生长因子的抗原表位序列替换所述单域抗体的CDR3区氨基酸序列，并将替换后的全长氨基酸序列转换为其基因编码序列，合成全长基因序列，并将该全长基因序列克隆到表达载体中，得到重组质粒；

(3)将得到的重组质粒转化至相应的宿主细胞内，筛选得到阳性克隆，此阳性克隆表达的重组蛋白即为权利要求3-7任一所述的包含有人血管内皮生长因子抗原表位的蛋白。

9.一种人血管内皮生长因子表位疫苗，其特征在于，所述表位疫苗包含权利要求3-7任一所述的蛋白。

10.权利要求3-7任一所述的蛋白在制备用于治疗或预防实体瘤的药物中的用途。

11.根据权利要求10所述的用途，其中所述的药物为疫苗。