[发明专利]度冷丁单克隆抗体及免疫检测板和试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及违禁药品的检测领域，尤其涉及度冷丁单克隆抗体及免疫检测板和试剂盒。

背景技术

毒品泛滥作为当今世界最严重的公害之一，越来越引起国际社会的关注。据联合国有关资料显示：毒品问题已对人类的生存和发展构成重大威胁，全世界至少有5100万人遭受毒品之害，全球每年毒品交易额已超过5000亿美元。近年来我国的毒品问题日趋严重，毒品滥用的趋势更为迅猛。上海地区的毒品犯罪形势也十分严峻。

度冷丁是国际国内严格管制的滥用药物。度冷丁又名哌替啶，学名N-甲基-4苯基哌啶-4-甲酸乙酯(其结构见图1)。度冷丁成瘾性很强，滥用度冷丁可造成严重的呼吸中枢障碍，其代谢产物去甲基度冷丁毒性更大，并可导致肌肉震颤和惊厥，严重损害人体健康，甚至导致死亡。由于度冷丁价格便宜，比海洛因容易买到，所以吸食、贩卖度冷丁的案件有严重上升趋势。

在打击毒品犯罪案件中，毒品检验工作在其中发挥极其重要的作用，它不仅为侦破毒品犯罪提供了线索，也为法庭量刑、定刑提供了科学的依据。目前，气质联用(GC-MS)检测法是度冷丁检测的标准方法，但其存在以下缺点：1、仪器价格昂贵，一般单位无法购买，不易普及；2、检测仪器要在良好的实验室才能操作，对仪器操作都要求严格的培训；3、对检材都需要提取及衍生化，其操作繁琐时间长；4、上述仪器不能快速用于现场检测。

特定的结合反应，例如抗原-抗体反应，已经广泛用于检测生物样品中存在的各种物质的免疫测试中。其中，胶体金免疫层析技术是近年来发展起来的一种独特的免疫诊断技术，具有免疫反应和色谱层析的特定，与GC-MS比较，胶体金层析技术具有特异性强、灵敏度高、简单快速、易于操作、结果容易判读、无需任何仪器设各等优点。

然而，度冷丁是一种小分子物质，只具备免疫反应性，而没有免疫原性，因此不能用来直接免疫动物产生抗体。因此目前本领域目前还没有一种成熟有效迅速的检测度冷丁的方法，因此本领域急需开发准确、特异性强、快速、灵敏、且能在现场检测度冷丁的新方法。

发明内容

本发明的目的是提供度冷丁的半抗原和完全抗原的合成方法。

本发明的另一目的是提供一种制备度冷丁单克隆抗体方法和具有分泌抗度冷丁单克隆抗体的杂交瘤细胞株。

本发明的另一目的是提供检测度冷丁的免疫检测试剂、免疫检测板和试剂盒。

在本发明的第一方面，提供了一种半抗原，所述半抗原具有式I所示的结构：

在本发明的第二方面，提供了一种完全抗原，所述完全抗原具有式II所示的结构：

其中，X为蛋白质载体。

在另一优选例中，所述蛋白质载体X选自下组：血蓝蛋白、牛血清白蛋白、卵清蛋白或γ球蛋白，较佳地，所述的蛋白质载体X是血蓝蛋白或牛血清白蛋白。

在本发明的第三方面，提供了一种制备本发明第二方面所述完全抗原的方法，所述方法包括步骤：

(a)对度冷丁进行硝化，在其苯环的对位接入硝基基团，从而形成对硝基-度冷丁；

(b)将对硝基-度冷丁中的硝基还原为氨基，以制得式I所示的对氨基-度冷丁；

(c)将对氨基-度冷丁与蛋白质载体连接，以制得式II所示的完全抗原。

在另一优选例中，步骤(a)的硝化反应条件如下：反应温度为-10-10℃，较佳地为-5-0℃；反应时间为0.5-24小时，较佳地为1-12小时，更佳地为2-5小时。

在另一优选例中，步骤(b)的还原条件如下：反应温度为室温-100℃，较佳地为50-70℃，更佳地为60℃；反应时间为1-24小时，较佳地为2-10小时，更佳地为2小时。

在另一优选例中，步骤(c)的连接反应条件如下：反应温度为0-40℃，较佳地为20-25℃；反应pH为3.0-6.0，较佳地为4.5；反应时间为2-24小时，较佳地为3-12小时，更佳地为4小时。

在本发明的第四方面，提供了本发明第一方面所述的半抗原或本发明第二方面所述完全抗原的用途，所述的半抗原或完全抗原用于制备度冷丁特异性的免疫球蛋白。

在本发明的第五方面，提供了一种免疫球蛋白(或抗体)，它特异性地与度冷丁结合。

在另一优选例中，所述免疫球蛋白由度冷丁单克隆抗体杂交瘤细胞株DLT-001CCTCC.C2011118所产生。