[发明专利]用于鉴别区分人带绦虫病种类的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种寄生虫分类检测试剂盒，以及这种试剂盒的使用方法，确切讲本发明是一种用于鉴别区分人带绦虫病种类的试剂盒及这种试剂盒的使用方法。

背景技术

猪带绦虫(Taenia solium)、牛带绦虫(Taenia saginata)和亚洲带绦虫(Taenia asiatica)是3种重要的人兽共患寄生虫病病原，且其成虫均寄生于人小肠内。三种成虫，尤其亚洲带绦虫与牛带绦虫的成虫特征几乎完全一致，依靠形态特征很难加以鉴别，况且很多情况下仅能得到成熟节片，所以导致主要依赖头节形态的显微镜观察显得无能为力。而幼虫形态、中间宿主种类和人体感染途径等却存在明显差别。人体感染猪带绦虫主要因生食含有囊尾蚴的猪肉引起，感染牛带绦虫主要因生食含有囊尾蚴的牛肉引起，人体感染亚洲带绦虫主要因生食含有囊尾蚴的猪肝或野猪等野生动物的内脏引起。绦虫病严重影响人们的身体健康和畜牧业经济的发展，因此加强人体带绦虫病流行区带绦虫的虫种鉴定及流行病学调查，明确各地区带绦虫的优势虫种，指导有关部门制定正确的预防、控制和净化措施，以及对临床患者进行科学有效的治疗均具有重要意义。

现有技术可以利用DNA探针进行三种虫种的鉴定，但成本相对较高。Yamasaki等利用多重PCR扩增线粒体cox1基因，对3种带绦虫进行鉴别，参见：“DNA differential diagnosis of taeniasis and cysticercosis by multiplex PCR.J Clin Microbiol”2004；42：548-553.MULTIPLEX PCR DIAGNOSIS FOR TAENIASIS AND CYSTICERCOSIS，SOUTHEAST ASIAN J TROP MED PUBLIC HEALTHVol 35(Suppl 1)2004：275-279，“Molecular Identification of Taenia Tapeworms by Cox1 Gene in Koh Kong，Cambodia”，Korean J Parasitol Vol.49，No.2：195-197，June 2011。但这一技术中在PCR反应体系里需同时加入3对引物，并且对模板纯度和浓度要求较高，同时还需要摸索不同引物之间的比例，另外采用该方法对各DNA样品进行扩增时不容易获得扩增产物。有学者用细胞色素C氧化酶1(mt COXI)基因片段PCR产物进行PCR反应后鉴别两虫种，或三种虫种，但PCR扩增产物需要测序，时间长，参见：“用cox1基因片段的PCR鉴别亚洲带绦虫和牛带绦虫”贵阳医学院学报2009，34(3)：239-261，“云南6地域带绦虫mtCOX I片段序列测定分析”中国人兽共患病学报(2009)25)12)：1199-1201。另外，现有技术中也有利用PCR产物限制性片段多态性技术，参见：“云贵两省三地带绦虫的分子鉴定-核糖体DNA第一内转录间隔区(ITS1)限制性酶切片段长度多态性(RFLP)分析”，中国寄生虫病防治杂志2005，18(5)：330-332JOURNAL OF CLINICAL MICROBIOLOGY，Jan.2000，38：133-137，“Differentiating Taenia solium and Taenia saginata Infections by Simple Hematoxylin-Eosin Staining and PCR-Restriction Enzyme Analysis”，用多个酶切对绦虫进行鉴定，但这种方法增加了成本和鉴定的时间。

发明内容

本发明提供一种能同时区分鉴别出检材属于猪带绦虫、牛带绦虫和亚洲带绦虫这三带绦虫的具体种类的试剂盒，以及具体的鉴别方法。

本发明的用于鉴别区分人带绦虫病种类的试剂盒内包括有两对人工序列，即序列表中记载的SEQ No.1和SEQ No.2。为方便具体使用，本发明的试剂盒内还可以放置提取DNA用试剂、PCR扩增用试剂与缓冲液、酶切酶等、

本发明的用于鉴别区分人带绦虫病种类的试剂盒使用方法，其特征在于从检材中提取DNA，然后用试剂盒内的两条引物进行聚合酶链式反应得到产物，将反应产物用琼脂糖凝胶电泳回收后进行酶切反应，然后再在琼脂糖中进行电泳，获得PCR-RFLP指纹图谱，根据PCR-RFLP指纹图谱中是否存在特定条带区分鉴别出检材属于何种带绦虫。

本发明的具体操作如下：

首先进行DNA基因组的提取：