[发明专利]一种大通量鉴定苏云金芽孢杆菌毒力基因的方法

权利要求书

1.一种高通量鉴定细菌功能基因的方法，包括以下步骤：

1)选取在光学显微镜或者扫描电镜下具有伴胞晶体的菌株作为目标菌株，提取质粒和基因组后，混合；

2)对混合后的质粒和基因组进行小片段文库测序，将测序数据进行组装，得到测序短序列组装为长的片段重叠群，进而组装为一定长度的片段；

3)利用软件分析步骤2)中片段中的开放阅读框ORFs，与生物信息数据库比对进行基因注释，选取与功能基因具有同源性的ORF-1；

4)将步骤3)获得的ORFs-1与现有菌种的功能基因比对，鉴定出与功能基因具有同源性的ORFs-2，即鉴定出总基因组中所含的基因类型。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，还包括根据步骤4)中同源性的ORFs-2设计引物，PCR扩增，克隆获得细菌的功能基因。

3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述的细菌为苏云金芽孢杆菌。

4.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述功能基因为cry、cyt、vip毒力基因、毒力因子调控基因和/或转录基因。

5.如权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤3)中所述的与生物信息数据库为KEGG、PFAM、GO、NR、Swiss-Prot和/或TrEMBL。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，其中NR、KEGG、Swiss-Prot和TrEMBL采用的是Blast，其参数为e-value 1e-5；PFAM的注释采用的是InterProScan，GO的注释基于NR注释结果的Blast2GO比对。

7.如权利要求1或2所述的方法在细菌毒力资源鉴定中的应用。

8.如权利要求3所述的方法鉴定的苏云金芽孢杆菌毒力基因在制备杀虫剂中的应用。

9.如权利要求3所述的方法鉴定的苏云金芽孢杆菌毒力基因在制备转基因植物中的应用。