[发明专利]同时定量检测玉米赤霉烯酮与伏马毒素B1的方法

权利要求书

1.一种同时定量检测玉米赤霉烯酮与伏马毒素B1的方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一，将ZEN半抗原分别与BSA和OVA偶联，得到偶联物ZEN-BSA和ZEN-OVA；将FB1半抗原分别与KLH和OVA偶联，得到FB1-KLH和FB1-OVA；

步骤二，分别用所述ZEN-OVA和FB1-KLH作为免疫原，采用常规方法制备抗ZEN的单克隆抗体和抗FB1的单克隆抗体；

步骤三，制备胶体金，用该胶体金分别标记所述抗ZEN的单克隆抗体和抗FB1的单克隆抗体；将所述标记后的单克隆抗体喷涂到金标垫上；

步骤四，在硝酸纤维素膜上进行ZEN-BSA、FB1-OVA、兔抗鼠二抗的点样，之后将该硝酸纤维素膜放入牛血清白蛋白溶液中封闭，干燥；

步骤五，将所述金标垫，所述点样后的硝酸纤维素膜，样品垫和吸收垫组装成试纸条；

步骤六，将已知的不同浓度的ZEN标准品溶液和FB1标准品溶液滴入试纸条样品槽中，显色，分别绘制ZEN、FB1浓度与显色值的标准曲线；

步骤七，将待测样品的甲醇提取液滴入试纸条样品槽中，显色，将显色值分别带入ZEN和FB1标准曲线中，即可得到待测样品中ZEN和FB1的含量。

2.如权利要求1所述的同时定量检测玉米赤霉烯酮与伏马毒素B1的方法，其特征在于，所述步骤三中，所述胶体金的颗粒直径为25nm。

3.如权利要求1所述的同时定量检测玉米赤霉烯酮与伏马毒素B1的方法，其特征在于，所述步骤三中，所述制备胶体金包括如下步骤：将100体积的0.01％HAuCl₄溶液加热至沸腾，之后加入1体积的1％柠檬酸三钠水溶液，煮沸7～10min，最后加三蒸水至100体积，制备得到25nm的胶体金溶液，所述百分数为质量体积百分数。

4.如权利要求1所述的同时定量检测玉米赤霉烯酮与伏马毒素B1的方法，其特征在于，所述步骤三中，所述抗ZEN的单克隆抗体和抗FB1的单克隆抗体在被标记之前经过透析除盐处理。

5.如权利要求1所述的同时定量检测玉米赤霉烯酮与伏马毒素B1的方法，其特征在于，所述步骤三中，所述标记包括如下步骤：在搅拌的条件下，向两管不同胶体金溶液中分别加入所述抗ZEN单克隆抗体和抗FB1单克隆抗体，使其终浓度分别达到3.6μg/mL和72μg/mL，室温下孵育15min，用0.1mol/L K₂CO₃调节胶体金溶液的pH分别为6.5和7.0，然后加入10％BSA至BSA的终浓度为0.1％，10000rpm离心20min，弃上清，再用含1％BSA的2mM pH为8.0的硼酸盐缓冲液洗涤，共洗涤3次。最后加入含4％蔗糖、6％海藻糖、BSA和叠氮钠分别为1％和0.05％的2mM pH为7.4的硼酸盐缓冲液中，即完成标记，所述百分数为质量体积百分数。

6.如权利要求1所述的同时定量检测玉米赤霉烯酮与伏马毒素B1的方法，其特征在于，所述步骤三中，所述喷涂为：将标记过的抗ZEN的单克隆抗体与标记过的抗FB1的胶体金标记单克隆抗体按浓度比为1∶1进行混合，之后喷涂到金标垫上。

7.如权利要求1所述的同时定量检测玉米赤霉烯酮与伏马毒素B1的方法，其特征在于，所述步骤三中，所述金标垫使用前进行如下处理：经PBS缓冲液浸泡30分钟，取出后，真空干燥。

8.如权利要求1所述的同时定量检测玉米赤霉烯酮与伏马毒素B1的方法，其特征在于，所述步骤四中，所述点样为：沿着硝酸纤维素膜层析的方向依次将稀释后的FB1-OVA、稀释后的ZEN-BSA、兔抗鼠二抗各喷涂为一线性条带，各条带之间保持间距。

9.如权利要求8所述的同时定量检测玉米赤霉烯酮与伏马毒素B1的方法，其特征在于，所述稀释为用含甲醇的PBS溶液进行稀释，所述PBS溶液浓度为0.05M，pH为7.4。

10.如权利要求1所述的同时定量检测玉米赤霉烯酮与伏马毒素B1的方法，其特征在于，所述步骤五中，所述样品垫使用前进行如下处理：经硼酸盐缓冲液浸泡30分钟，取出后，真空干燥。