[发明专利]一种甲型流感病毒甄别与耐药检测基因芯片的制备和用途

说明书

技术领域

本发明涉及甲型流感病毒甄别与耐药检测基因芯片的制备和用途，属于基因芯片检测技术领域。

背景技术

流感病毒(influenza virus)在病毒分类学上属正粘病毒科(Orthomyxoviridae)。它的基因组是分节段的单股负链RNA。根据病毒核蛋白(NP)和膜蛋白(MP)抗原特性及其基因特性不同，把流感病毒分为甲、乙、丙三型。甲型流感病毒根据其表面血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)蛋白结构及其基因特性又可分成许多亚型，至今甲型流感病毒已发现的血凝素有16个亚型(H1-16)，神经氨酸酶有9个亚型(N1-9)。由于基因组是分节段的，故易产生同型不同株间基因重配。尤其是人甲型流感病毒HA基因能经常不断的发生点突变，导致其编码的HA蛋白分子上氨基酸序列发生替换，造成其抗原性经常不断的发生漂移，每次抗原性漂移常带来不同程度的流感流行。

正确判断流感病毒型别，是流行病学调查和疫情防控的重要环节。近100年来，已经出现了数次不同亚型的流感病毒全球大流行。1918年西班牙流感(H1N1型)，造成5000-6000万人死亡；1957年亚洲流感(H2N2)，死亡至少200万人；1968年香港流感(H3N2型)，死亡人数超过100万；1997年香港禽流感(H5N1型)，死亡人数虽少于前几次流感，但死亡率高达33％。甲型H1N1流感自2009年3月在墨西哥暴发以来，迅速在全球流行，成为国际性的公共卫生事件。世界卫生组织(WHO)于2009年6月11日将甲型H1N1流感病毒大流行的预警级别提升至最高的6级，全球共有超过214个国家和地区向WHO报告了经实验室确诊的甲型H1N1流感病例，至少18001人死亡。随着全球人口流动性的不断增加，流感病毒交替、混合流行将成为常态。

流感病毒耐药性监测，是指导疫情防控和临床用药的必然要求。目前有两类正式上市的药物可用于治疗流感，一类是神经氨酸酶抑制剂，包括磷酸奥司他韦(oseltamivir//达菲)和扎那米韦(zanamivir//乐感清)；另一类是M2通道阻滞剂，包括金刚烷胺(amantadine)和金刚乙胺(rimantadine)。病毒耐药性的产生是抗病毒治疗失败的主要原因之一。由于流感病毒为节段型RNA病毒，突变发生率很高；随着抗病毒治疗的展开，药物选择压力等因素导致病毒耐药性不可避免地出现。据调查显示，目前北美地区98％的季节性流感病毒H3N2对金刚烷胺耐药，98％的季节性流感病毒H1N1对达菲耐药；禽流感病毒H5N1对达菲耐药的病例也屡有报道。自2009年6月丹麦报告了全球第一例甲型H1N1流感达菲耐药病例后，截至2010年2月3日，全球已有20个国家报告了达菲耐药的甲型H1N1流感病例至少225例。随着达菲的广泛使用，更多耐药株的出现将不可避免。耐药型病毒的产生和传播可导致抗病毒治疗失败和民众恐慌。尽管甲型H1N1流感病毒耐药病例为数不多并呈散发状，但仍引起了公众和研究者的关注。因此，对甲型H1N1流感病毒耐药性的监测和研究具有重要的意义。

甲型流感病毒具有多种高致病性亚型，而且各种亚型之间只是在蛋白或核酸水平具有细微差异，而临床上存在甄别流感病毒各种亚型的需求。这种情况对准确甄别几种重要的亚型提出了很高的技术和方法上的要求。针对不同的检测对象，通常分为病毒核酸检测和蛋白检测，病毒核酸检测因其灵敏度较高而被广泛应用。