[发明专利]百草枯半抗原、百草枯完全抗原及其制备方法

权利要求书

1.一种百草枯半抗原，具有式I结构：

其化学名称为N-甲基-N’-戊酸基-二吡啶二溴化物。

2.权利要求1所述百草枯半抗原的制备方法，由如下步骤组成：

(1)N-甲基-二吡啶碘化物的合成将250ml三口圆底烧瓶固定于铁架台，避光通氮。4，4′-二吡啶808mg溶解在8ml丙酮中，搅拌冷却至4℃，将碘甲烷400μl滴加到上述溶液中。保持4℃搅拌。大约6h反应达到平衡。过滤，用丙酮洗涤，抽干，得黄色针状结晶。此结晶用无水乙醇重结晶。真空干燥。

(2)N-甲基-N′-戊酸乙酯基-二吡啶碘溴化物的合成0.85mgN-甲基-二吡啶化合物溶于10ml二甲基甲酰胺(DMF)，通氮搅拌溶解，并控制温度至120℃，缓慢滴加1.7ml 5-溴戊酸乙酯，回流4h，并同时进行TLC监控至反应物基本反应完全，停止反应。自然冷却，室温放置。冷却析出红色片状结晶。过滤，抽干，真空干燥，得到红色片状结晶。

(3)N-甲基-N′-戊酸基-二吡啶二溴化物的合成500mgN-甲基-N′-戊酸乙酯基-二吡啶化合物于通氮气四口瓶，加入40％溴氢酸水溶液18ml，混合，加热回流1h。TLC指示反应物全部水解。停止加热。在旋转蒸发器上减压蒸去过量的酸和水，保持水浴温度不超过60℃，蒸干，得到油状物。冷却后，加入少量丙酮即有白色固体析出。过滤，抽干，真空干燥。

3.一种百草枯完全抗原，具有式II结构：

4.权利要求3所述百草枯完全抗原的制备方法，由如下步骤组成：

9mg百草枯半抗原溶于500ul二甲基亚砜(DMSO)，加入15ul三正丁胺，室温搅拌5min，然后加入8ul氯甲酸异丁酯，室温搅拌30min。将载体蛋白溶于2ml的硼酸盐缓冲溶液中。将百草枯半抗原溶液缓慢滴入载体蛋白溶液中。4℃搅拌过夜，用PBS透析三天，每四个小时换一次透析液。

5.权利要求4所述百草枯半抗原溶于二甲基亚砜的浓度为15-20mg/mL。

6.权利要求4所述载体蛋白可以是牛血清白蛋白(BSA)、卵清白蛋白(OVA)、人血清白蛋白(HAS)或者匙孔蓝蛋白(KLH)等。