[发明专利]一种红霉素发酵液的发酵方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种微生物发酵方法，特别涉及一种红霉素的低糖低氮发酵方法，属于医药生物技术领域。

背景技术

红霉素(Erythromycin)是1952年从红色链霉菌(Streptomyces erythreus)培养液中分离出来的一种碱性抗生素。红霉素具有广谱抗菌作用，对革兰阳性菌、如葡萄球菌、化脓性链球菌、绿色链球菌、肺炎链球菌、粪链球菌、梭状芽孢杆菌、白喉杆菌等有较强的抑制作用。对革兰阴性菌、如淋球菌、螺旋杆菌、百日咳杆菌、布氏杆菌、军团菌、以及流感嗜血杆菌、拟杆菌也有相当的抑制作用。我国从1957年试制成功并逐步投入大生产。

目前，国内已有关于红霉素发酵工艺的研究，如华东理工大学韩德全等人进行的红霉素发酵工艺优化研究(2004年华东理工大学工程硕士学位论文)；中国专利说明书CN101134972B中也描述了利用菌渣套用技术改进红霉素的发酵工艺等，随着高产菌株的投产及发酵方法的不断改进，使发酵单位水平不断提高，但仍然没有解决原料消耗大，糖氮利用率低等问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种红霉素发酵方法。

本发明目的是通过如下技术方案实现的：

本发明所述的红霉素发酵液的发酵方法包括如下步骤：

(1)红霉素种子液培养：①母斜面孢子制备：将冷冻保存在砂土管中的红霉素链霉菌(产生菌)孢子(本发明使用的红霉素链霉菌为广东省微生物菌种保藏中心商业上广泛销售的菌种，GIM编号：GIM4.14，其他编号：AS4.198)，接种于灭菌的斜面培养基上，在温度32～34℃条件下，培养7～9天；②子斜面孢子制备：将母斜面孢子，接种于灭菌的斜面培养基上，在温度32～34℃条件下，培养7～9天；③种子培养：将子斜面孢子，接种于灭菌的液体种子培养基中，经过三级种子扩大培养，得到红霉素种子液；

(2)红霉素发酵：将红霉素种子液按10～20％体积比接种于灭菌的培养基中，通入无菌空气并开启搅拌，添加营养物质，在温度32～34℃条件下，培养7～10天，得红霉素发酵液。

本发明所述的母斜面孢子培养基是由下述组分组成：淀粉0.1～1.0重量份，玉米浆0.05～0.2重量份，琼脂0.1～1.0重量份，葡萄糖0.1～1.0重量份，氯化钠0.5～2.0重量份，氯化钙0.1～1.0重量份，用自来水定容到100体积份。

本发明所述的母斜面孢子培养基组分可以优化为：淀粉0.5重量份，玉米浆0.1重量份，琼脂0.5重量份。葡萄糖0.5重量份，氯化钠1重量份，氯化钙0.5重量份，用自来水定容到100体积份。

本发明所述的子斜面孢子培养基是由下述组分组成：淀粉0.1～1.0重量份，玉米浆0.05～0.2重量份，琼脂0.1～1.0重量份，葡萄糖0.1～1.0重量份，氯化钠0.5～2.0重量份，氯化钙0.1～1.0重量份，用自来水定容到100体积份。

本发明所述的子斜面孢子培养基组分组成优化为：淀粉0.4重量份，玉米浆0.2重量份，琼脂0.4重量份，葡萄糖0.4重量份，氯化钠1.5重量份，氯化钙1.0重量份，用自来水定容到100体积份。

本发明所述的一级种子扩大培养条件为：(1)培养基组成：黄豆粉2～4重量份，淀粉1～2重量份，CaCO₃0.6～0.8.重量份，糊精1～2重量份，硫铵0.2～0.4重量份，玉米浆1～4重量份，植物油0.5～1重量份，用自来水定容到100体积份；(2)温度为32～34℃；(3)培养时间48～96小时；

本发明所述的一级种子扩大培养基组成优化为：黄豆粉3重量份，淀粉1.5重量份，CaCO₃0.7重量份，糊精1.5重量份，硫铵0.3重量份，玉米浆2重量份，植物油0.7重量份，用自来水定容到100体积份。

本发明所述的一级种子扩大培养基组成优化为：黄豆粉2重量份，淀粉2重量份，CaCO₃0.75重量份，糊精1重量份，硫铵0.4重量份，玉米浆3重量份，植物油0.8重量份，用自来水定容到100体积份。

本发明所述的二，三级种子扩大培养条件为：(1)培养基组成：黄豆粉2.0～4.5重量份，淀粉2.5～4.0重量份，CaCO₃0.5～0.7重量份，氯化钠0.4～0.6重量份，糊精2.5～4.0重量份，硫铵0.1～0.3重量份，玉米浆1～2重量份，植物油0.8～1.5重量份，消沫剂0～0.02重量份，用自来水定容到100体积份；(2)温度为32～34℃；(3)培养时间24～48小时。