[发明专利]5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸合酶抗体的免疫原及其制备方法与应用

权利要求书

1.制备5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸合酶抗体的免疫原的方法，包括如下步骤：

(1)将载体蛋白与双功能试剂进行反应，得到反应产物I；所述双功能试剂选自4-马来酰亚胺基丁酸-N-琥珀酰亚胺酯、琥珀酰亚胺基4-[p-马来酰亚胺苯基]丁酸盐或N-[ε-马来酰亚胺乙酰基氧]硫代琥珀酰亚胺酯；

(2)将所述步骤(1)得到的反应产物I与序列表中序列1所示的多肽进行反应，得到反应产物II，即得到5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸合酶抗体的免疫原。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

所述步骤(1)中所述载体蛋白与所述双功能试剂的投料摩尔比为1∶10-1∶20；

所述步骤(2)中所述反应产物I与所述多肽的投料摩尔比为1∶10-1∶20。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述步骤(1)中所述反应的温度为20℃-25℃，所述反应的时间为1h-3h。

4.根据权利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于：所述步骤(2)中所述反应的温度为20℃-25℃，所述反应的时间为10h-20h。

5.根据权利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于：所述步骤(1)中所述载体蛋白为牛血清白蛋白或卵清白蛋白。

6.根据权利要求1-5中任一所述的方法，其特征在于：所述步骤(1)中在得到所述反应产物I之后，还包括以下步骤：

将所述反应产物I进行凝胶过滤层析，用0.01M PH7.5磷酸盐缓冲液进行洗脱，收集OD₂₇₈为1.5-3.0的洗脱液，即得到纯化的反应产物I；所述凝胶过滤层析的介质为Sephadex G-25。

7.根据权利要求1-6中任一所述的方法，其特征在于：所述步骤(2)中还包括将所述反应产物II进行透析，得到纯化的反应产物II的步骤。

8.根据权利要求1-7中任一所述的方法制备得到的5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸合酶抗体的免疫原。

9.由权利要求8所述的5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸合酶抗体的免疫原制备得到的抗体。

10.权利要求8所述的5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸合酶抗体的免疫原和/或权利要求9所述的抗体在鉴别转5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸合酶基因植物中的应用。