[发明专利]一种绝对荧光定量PCR检测方法无效
| 申请号： | 201110374471.5 | 申请日： | 2011-11-23 |
| 公开（公告）号： | CN102363814A | 公开（公告）日： | 2012-02-29 |
| 发明（设计）人： | 李慧锋;李丽 | 申请（专利权）人： | 山西农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;G01N21/64 |
| 代理公司： | 太原华弈知识产权代理事务所 14108 | 代理人： | 李毅 |
| 地址： | 030801 山*** | 国省代码： | 山西;14 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 绝对 荧光 定量 pcr 检测 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种绝对荧光定量PCR检测方法，其方法如下：
(1)提取样品总RNA；
(2)将(1)提取的总RNA进行反转录和基因片段扩增，得到单链的cDNA待测样品；
(3)将(2)的cDNA待测样品进行纯化，利用纯化的cDNA制备带有EcoRⅠ酶切位点的重组质粒；
(4)EcoRⅠ酶切(3)获得的质粒，得到双链的线性质粒；
(5)计算(4)质粒的拷贝数，以此作为标准品；
(6)将标准品稀释成不同梯度浓度，作为模板进行荧光定量PCR反应，反应完成后，得出每个拷贝数所对应的Ct值，以标准品拷贝数的对数值为横坐标，测得的每个拷贝数所对应的Ct值为纵坐标，得到标准曲线；
(7)按照(6)中的PCR反应体系，将cDNA待测样品在荧光定量PCR仪中先扩增一次，得到双链的cDNA待测样品；
(8)将双链的cDNA待测样品按照(6)的荧光定量PCR反应方法进行扩增，反应完成后，得出其所对应的Ct值；
(9)将待测样品的Ct值带入步骤(6)的标准曲线中，得到待测样品的起始拷贝数。
2.根据权利要求1所述的绝对荧光定量PCR检测方法，其特征是将双链的cDNA待测样品与双链的线性质粒标准品同时进行荧光定量PCR反应。
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