[发明专利]一种利用休止细胞渥堆发酵烟梗制备烟用香料的方法

权利要求书

1.一种利用休止细胞渥堆发酵烟梗制备烟用香料的方法，其特征在于，方法如下：

①休止细胞制备：将分离自烟叶表面的产香菌株在LB液体培养基中扩大培养，离心弃去培养基后收集菌株待用；配制磷酸盐缓冲液，缓冲液的浓度控制在其渗透压可满足细胞生长所需渗透压；将离心收集的产香菌株全部接于磷酸盐缓冲液中，在20-37℃培养20-72小时，制得休止细胞待用；

②微生物渥堆发酵处理：在烟梗中加入2-5倍水灭菌，将休止细胞依照灭菌烟梗总质量按比例接菌，接菌量控制在总质量的0.5-10%；接菌后将烟梗和休止细胞混匀后在20-37℃渥堆培养发酵24-120小时获得发酵产物；

③在发酵产物中加入水，加热提取并浓缩后制得最终发酵烟梗提取物，即为烟用香料。

2.根据权利要求1所述的一种利用休止细胞渥堆发酵烟梗制备烟用香料的方法，其特征在于，将发酵烟梗提取物进行乙醇回溶提取，去除发酵烟梗提取物中的杂质。

3.根据权利要求1或2所述的一种利用休止细胞渥堆发酵烟梗制备烟用香料的方法，其特征在于，所述产香菌株取自于烟叶表面的产香微生物。

4.根据权利要求1或2所述的一种利用休止细胞渥堆发酵烟梗制备烟用香料的方法，其特征在于，所述配制磷酸盐缓冲液的磷酸盐为磷酸氢钠、磷酸二氢钠、磷酸钾、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾中的一种或几种，溶液PH值为7.0-7.4；溶液浓度要求能够平衡菌株细胞渗透压，控制在20-70毫摩尔/升。