[发明专利]多肽固相合成中的低交联度微球载体

说明书

技术领域

本发明属于多肽/蛋白质合成领域，具体而言，本发明涉及使用低交联度微球载体的多肽固相合成方法，以及其中所使用的载体。

 

背景技术

多肽的固相合成方法已经广泛使用，目前一般常用于固相合成的载体树脂材料有聚苯乙烯-二乙烯苯、TentaGel等。

 聚苯乙烯-二乙烯苯载体树脂最为常用，但是本发明人发现，其在极性溶剂中的溶胀性不好，而且载体的微球内部具有较强的疏水性，内部交联网络伸展性差，形成位阻效应，进行小分子合成时影响不明显，但使得分子量大的反应分子（如，多肽）难于进入网络活性反应位点，导致整体反应动力学低下，时间长，产物得率低，纯度不高。

TentaGel载体是通过引入PEG接枝改性后得到的载体树脂，使得这类树脂具有良好的溶胀性能，树脂骨架亲水，性能比苯乙烯二乙烯苯聚合载体得到大大改善，但确定是切割终产物受PEG碎片污染，特别在多肽药物的合成上，导致增加纯化难度。

       本发明人经过长期而艰苦的实践，从大量的聚合材料中，发现了一种新的低交联度微球载体，溶胀性质优良，特别适用于多肽的固相合成。使用该低交联度微球载体进行多肽固相合成，产率高，反应动力学性质优良。

 

发明内容

 本发明要解决的技术问题在于提供低交联度微球载体用于固相合成，其利用了本发明的低交联度微球载体溶胀性优良、反应动力学性质良好、不易产生碎片，从而使得诸如固相合成的多肽产率高、合成速度快、产物纯度高。

       具体而言，在第一方面，本发明提供了固相合成基质在固相合成多肽中的应用，其特征在于，所述固相合成基质是以式I所示化合物制备的

式I            。

以式I所示化合物又称为1，4-双对乙烯苄氧基丁烷（1,4-bis((4-vinylbenzyl)oxy)butane），在本文中可以简称为BVB。

优选在本发明的第一方面中，所述固相合成多肽是用Fmoc固相多肽合成法进行的。这是当前最常用的固相多肽合成的方法，市售的多肽自动合成仪通常都是应用该方法，因此本发明的固相合成基质可以直接应用于这些多肽自动合成仪中。由于本发明在反应动力学性质方面良好的表现，在短时间内就能完成将氨基酸连接的反应，使得多肽合成速度快，因此更优选在本发明的第一方面中，所述Fmoc固相多肽合成法中每一氨基酸连接步骤的时间不超过30分钟。

       另外，由于不涉及对现有固相合成步骤的改变，因此在第一方面，本发明还提供了式I所示化合物在制备固相合成方法中所用的固相合成基质的应用

式I            。

优选在本发明的第一方面中，所述固相合成基质是具有羟基连接活性、氨基连接活性、氯乙酰基连接活性、氯苯甲基连接活性、或哌嗪基连接活性的基质。在本文中，如无相反指示，具有特定基团连接活性可以与该基团活化互换使用，指的是相应机制上有游离的该基团可供化学反应。这些连接活性对连接固相合成的各种原料或原料上的不同反应基团（如，氨基酸的氨基、羧基或侧链基团）来说是有益的。本发明的具体实施方式已经证明了采用式I所示化合物能够提供给最终的固相合成基质多种连接活性，可以增加固相合成的选择性，从而对原料的适应性好。

优选在本发明的第一方面中，所述制备的过程包括式I所示化合物与苯乙烯共聚的过程。其中优选所述制备的过程选自：

（a）在含聚乙烯醇的水溶液中加入苯乙烯、式I所示化合物、和过氧化苯甲酰，搅拌后保温于60~90℃（优选为70~85℃，最优选为80℃），再过滤，洗涤，干燥，筛分选得粒径为50~250目（优选为100~200目）的微球；然后，向微球加入二氯甲烷溶胀，再加入1,4-二氯甲氧基丁烷并滴加无水四氯化锡进行反应，之后抽滤，洗涤，干燥；然后加入二甲基乙酰胺溶胀，搅拌，再加入含对羟基苯甲醇的二甲基乙酰胺溶溶液和甲醇钠，在N₂保护下，在40~60℃（优选为45~55℃，最优选为50℃）下搅拌反应，过滤，洗涤，干燥，由此制备获得固相合成基质；