[发明专利]一种快速筛选水产动物细菌性疾病防治用药的方法

说明书

技术领域

 本发明涉及动物细菌性疾病防治药物的筛选，具体是一种快速筛选水产动物细菌性疾病防治用药的方法。

背景技术

细菌性疾病是由细菌引起的水产动物疾病，是水产养殖中最常见也是危害最大的一类疾病，其在各年病害爆发病例中比例最大，给水产养殖造成的经济损失最为严重。因此，能够有针对性的、及时准确地使用药物杀灭病原菌是有效控制水产动物细菌性病害的重要措施。目前，水产动物细菌性疾病防治药物筛选方法一般先进行病原菌的分离纯化后再通过药敏试验筛选出敏感性药物，这个过程一般至少需要4~6天，而市场上销售的快速筛选试剂盒也因保藏时间短、容易污染而未受到广大渔民的充分认可。

发明内容

本发明的目的在于提供一种快速筛选水产动物细菌性疾病防治用药的方法。

本发明提供的一种快速筛选水产动物细菌性疾病防治用药的方法，包括如下步骤：

1）选取濒死的患病水产动物，用75％酒精反复擦拭体表后置于无菌操作台中，取其病灶组织于含营养肉汤的具塞塑料离心管中，于35~37℃、200r/min振荡12h至具塞塑料离心管中的营养肉汤浑浊；

2）无菌条件下用1mL玻璃移液管吸取0.2 mL具塞塑料离心管中浑浊液体于营养琼脂平板中，在用消毒的涂布棒在营养琼脂平板上反复涂布均匀后，再用消毒的镊子夹取不同药敏纸片分别贴到营养琼脂平板上，最后将贴有不同药敏纸片的营养琼脂平板于35~37℃培养12~18h后测定抑菌环直径（mm），并根据杭州天和微生物试剂有限公司的纸片法药敏试验抑菌环直径判定标准，筛选出高度敏感药物作为防治药物。

所述的药敏纸片为：复方新诺明、复合磺胺、氟哌酸、庆大霉素、恩诺沙星、氧氟沙星、左氟沙星、氨苄青霉素和多粘菌素等的药敏纸片。

所述的水产动物为草鱼、鲫鱼、鲢鱼或虎纹蛙等。

与现有技术相比本发明能够及时准确地筛选出水产动物细菌性病害的防治药物，可提高水产养殖用药的准确性与时效性。

具体实施方式

实施例1

1. 材料与方法

1.1 实验材料

具有典型细菌性败血症病症的草鱼，采集于上海崇明水产技术推广站的养殖池中；复方新诺明、复合磺胺、氟哌酸、庆大霉素、恩诺沙星、氧氟沙星、左氟沙星、氨苄青霉素、多粘菌素等药敏纸片，购于杭州天和微生物试剂有限公司；具塞塑料离心管、营养肉汤、营养琼脂平板，购于国药集团化学试剂有限公司；含营养肉汤的具塞塑料离心管，将营养肉汤分装于50 mL具塞塑料离心管，20 mL/管，于121℃灭菌20min，4℃冰箱保存备用；1mL玻璃移液管，于121℃灭菌20min备用。

1.2 防治药物的快速筛选方法

1.2.1 解剖用具的消毒

实验用剪刀、镊子、解剖盘、涂布棒等均用75％酒精反复擦拭消毒，于无菌操作台中紫外照射备用

1.2.2 病灶组织的选取与温控振荡

选取濒死的患病草鱼，用75％酒精反复擦拭体表后在无菌操作台中进行常规无菌操作，取其病灶组织于含营养肉汤的具塞塑料离心管中，于35~37℃、200r/min振荡12h至具塞塑料离心管中的营养肉汤浑浊。

1.2.3 防治药物的筛选

无菌条件下用1mL玻璃移液管吸取0.2 mL具塞塑料离心管中浑浊液体于营养琼脂平板中，在用消毒的涂布棒在营养琼脂平板上反复涂布均匀后，再用消毒的镊子夹取各药敏纸片贴到营养琼脂平板上，最后将贴有药敏纸片的营养琼脂平板于35~37℃培养12~18h后测定抑菌环直径（mm），并根据杭州天和微生物试剂有限公司的纸片法药敏试验抑菌环直径判定标准，筛选出高度敏感药物作为防治药物。

2 实验结果

实验结果见表1。实验结果表明，各药物在营养琼脂平板上产生的抑菌环直径大小依次为复方新诺明>庆大霉素>复合磺胺>氟哌酸>恩诺沙星>左氟沙星、多粘菌素>氧氟沙星>氨苄青霉素。根据纸片法药敏试验抑菌环直径判定标准，确定复方新诺明、庆大霉素、多粘菌素为高敏药物，为草鱼细菌性败血症的首选防治药物。

表1 不同药物在营养琼脂平板上产生的抑菌环直径及其敏感程度