[发明专利]一种埃博霉素B的发酵生产工艺

权利要求书

1.一种埃博霉素B的发酵生产工艺，其特征在于，包括以下步骤：

1)按100ml接种1～10mg菌种的比例，将纤维堆囊菌(Sorangium cellulosum)接种于发酵液中，然后加入菌种质量100～800倍的特异性吸附埃博霉素B的分子印迹聚合物，在25～35℃下摇床发酵96～192h；

2)发酵完成后，分离并收集发酵液中的吸附了埃博霉素B的分子印迹聚合物，然后用甲醇多次浸提，将埃博霉素B从分子印迹聚合物中分离出来，分别收集含有埃博霉素B的甲醇和分子印迹聚合物。

2.如权利要求1所述的埃博霉素B的发酵生产工艺，其特征在于，所述的发酵液中含有黄豆粉20～50g/L、玉米淀粉5～10g/L、磷酸二氢钠1～2g/L、磷酸氢二钠1～2g/L、MgSO₄·7H₂O2～5g/L、FeSO₄·7H₂O 0.1～0.5g/L、CaCl₂ 2～5g/L、MnCl₂ 0.1～0.5g/L和葡萄糖10～15g/L，pH为7.2～7.5。

3.如权利要求1或2所述的埃博霉素B的发酵生产工艺，其特征在于，在发酵培养时还进行葡萄糖的补加：在发酵培养的第1～48h每隔30min按每100ml发酵液加入0.05～0.2g葡萄糖的比例补加，在第48h至发酵结束每隔10～15min按每100ml发酵液加入0.1～0.4g葡萄糖的比例补加。

4.如权利要求2所述的埃博霉素B的发酵生产工艺，其特征在于，所述的发酵液中还含有土豆淀粉、葡聚糖、甘露糖中的一种，其含量为5～10g/L；

所述的发酵液中还含有蛋白胨、水解乳蛋白、玉米蛋白粉、KNO₃、NH₄SO₄中的一种作为氮源，氮源的含量为2～8g/L。

5.如权利要求1所述的埃博霉素B的发酵生产工艺，其特征在于，所述的分子印迹聚合物的制备为：

按照埃博霉素B：功能单体∶交联剂∶引发剂∶溶剂＝1∶(2～6)∶(20～30)∶(0.6～1)∶(3～20)的摩尔比，将上述反应原料加入到反应容器中，在搅拌下通入氮气20～30min；然后在45～55℃下聚合反应12～24h，再在55～65℃下聚合反应8～12h；聚合反应完成后将反应产物破碎、研磨、过筛后得到粒径为40～60μm的聚合反应物；

所述的功能单体为甲基丙烯酸；所述的交联剂为乙二醇二甲基丙烯酸酯；

收集的聚合反应物并用水充分洗涤后，然后用乙酸∶甲醇体积比＝1∶9～3∶7的混合溶液浸提多次，脱去埃博霉素B，冷冻干燥后得到埃博霉素B的分子印迹聚合物。

6.如权利要求5所述的埃博霉素B的发酵生产工艺，其特征在于，所述的引发剂为偶氮二异丁腈或过氧化二苯甲酰；所述的溶剂为去离子水、甲醇或乙腈。

7.如权利要求5所述的埃博霉素B的发酵生产工艺，其特征在于，所述的摇床的转速为100～160r/min。

8.如权利要求1所述的埃博霉素B的发酵生产工艺，其特征在于，所述的纤维堆囊菌(Sorangium cellulosum)为ATCC15384、ATCC25569或ATCC25531。

9.如权利要求1所述的埃博霉素B的发酵生产工艺，其特征在于，所述的纤维堆囊菌(Sorangium cellulosum)为经过理化诱变、杂交、原生质体融合或Genome shuffling改造而筛选到的高产菌株。

10.一种埃博霉素B的分子印迹聚合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

按照埃博霉素B：功能单体∶交联剂∶引发剂∶溶剂＝1∶(2～6)∶(20～30)∶(0.6～1)∶(3～20)的摩尔比，将上述反应原料加入到反应容器中，在保护气氛下超声振荡20～30min，在搅拌下通入氮气20～30min；然后在45～55℃下聚合反应12～24h，再在55～65℃下聚合反应8～12h；聚合反应完成后将反应产物破碎、研磨、过筛后得到粒径为40～60μm的聚合反应物；

所述的功能单体为甲基丙烯酸；所述的交联剂为乙二醇二甲基丙烯酸酯；所述的引发剂为偶氮二异丁腈或过氧化二苯甲酰；所述的溶剂为去离子水、甲醇或乙腈；

将收集的聚合反应物用水充分洗涤后，然后用乙酸∶甲醇体积比＝1∶9～3∶7的混合溶液连续洗涤，脱去埃博霉素B，冷冻干燥后得到埃博霉素B的分子印迹聚合物。