[发明专利]中华按蚊抗药性PCR-RFLP检测试剂盒及其专用引物

权利要求书

1.一种检测中华按蚊中kdr基因突变位点的专用引物，由引物组A和引物组B组成：

所述引物组A由引物1和引物2组成，所述引物1和引物2的核苷酸序列分别为序列表中序列1和序列表中序列2；

所述引物组B由引物3和引物4组成，所述引物3和引物4的核苷酸序列分别为序列表中序列3和序列表中序列4。

2.根据权利要求1所述的引物，其特征在于：

所述引物组A和所述引物组B为独立包装；

所述突变位点为L1014F或L1014C。

3.一种检测中华按蚊中kdr基因突变位点的试剂，由试剂A和试剂B组成，所述试剂A由权利要求1所述的专用引物中的引物组A和HindⅢ组成；所述试剂B由权利要求1所述的专用引物中的引物组B和HphⅠ组成。

4.根据权利要求3所述的试剂，其特征在于：

所述试剂A和所述试剂B均为独立包装；

所述引物组A、所述HindⅢ、所述引物组B和所述HphⅠ均为独立包装。

5.一种检测中华按蚊中kdr基因突变位点的PCR试剂，由PCR试剂1和PCR试剂2组成，所述PCR试剂1由权利要求1所述的专用引物中的引物组A、dNTP、DNA聚合酶、Mg²⁺及PCR缓冲液组成；所述PCR试剂2由权利要求1所述的专用引物中的引物组B、dNTP、DNA聚合酶、Mg²⁺及PCR缓冲液组成；

所述引物组A中的各引物在所述PCR试剂1中的浓度均为0.67pmol/μl，

所述引物组B中的各引物在所述PCR试剂2中的浓度均为0.67pmol/μl，

所述突变位点为L1014F或L1014C。

6.一种制备检测中华按蚊中kdr基因突变位点的试剂盒，为如下1)或2)：

1)所示的试剂盒包括权利要求3或4所述的试剂；

2)所示的试剂盒包括权利要求5所述的PCR试剂。

所述突变位点为L1014F或L1014C。

7.权利要求1或2所述专用引物或权利要求3或4所述试剂或权利要求5所述PCR试剂或权利要求6所述试剂盒在检测中华按蚊中kdr基因突变位点、检测中华按蚊抗药性或制备检测中华按蚊抗药性产品中的应用；所述突变位点具体为L1014F或L1014C，所述抗药性为抗菊酯类药物；所述菊酯类药物具体为溴氰菊酯、氯菊酯或高效氯氰菊酯。

8.一种检测或辅助检测中华按蚊中kdr基因的突变位点的方法，包括如下步骤：

1)用权利要求1或2所述专用引物或权利要求3或4所述试剂或权利要求5所述PCR试剂或权利要求6所述试剂盒中的所述引物组A和所述引物组B分别对待测中华按蚊进行PCR扩增，分别得到A扩增产物和B扩增产物；

2)分别用HindⅢ酶切步骤1)得到的所述A扩增产物和用HphⅠ酶切步骤1)得到的所述B扩增产物，分别得到酶切产物A和酶切产物B；

检测所述酶切产物A和所述酶切产物B，

若所述酶切产物A得到154bp和42bp产物，且对应的所述酶切产物B得到123bp和32bp产物，则所述kdr基因不含或候选不含有所述突变位点；

若所述酶切产物A得到196bp产物，且对应的所述酶切产物B得到155bp产物，则所述kdr基因的突变位点为或候选为L1014C；

若所述酶切产物A得到154bp和42bp产物，且对应的所述酶切产物B得到155bp产物，则所述kdr基因的突变位点为或候选为L1014F；

若所述酶切产物A得到196bp、154bp和42bp产物，且对应的所述酶切产物B得到155bp、123bp和32bp产物，则所述kdr基因的突变位点为或候选为L1014C；

若所述酶切产物A得到154bp和42bp产物，且对应的所述酶切产物B得到155bp、123bp和32bp产物，则所述kdr基因突变位点为或候选为L1014F；

若所述酶切产物A得到196bp、154bp和42bp产物，且对应的所述酶切产物B得到155bp产物，则所述kdr基因突变位点为或候选为L1014F和L1014C。